Name: El aislamiento de las células endoteliales de vena umbilical (HUVEC) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: Aprende a aislar células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC) para estudios de angiogénesis in vitro. Este protocolo detalla el uso de solución salina de Hank y colagenasa para obtener células viables.

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Procedimiento <ol><li> Coloque el cable en la almohadilla limpia y aplique de exceso de sangre. Haga cortes frescos en ambos extremos del cable. </li><li> Introduzca 21 1 / 2 G aguja con el capuchón de la aguja de plástico, en la vena. (La vena es la apertura más grande, los 2 más pequeñas son las arterias) </li><li> Abrazadera de la aguja en su lugar con una pinza hemostática y acoplar la jeringa de 20 cc de Hanks a la aguja. </li><li> Empuje el Hanks a través de la vena con una presión moderada. Recoger los residuos en el vaso con cloro. (Sosteniendo la aguja y la cuerda con una mano mientras empuja sería evitar que la aguja de salir de la vena.) Si hay una gran cantidad de sangre en la vena, lavar por segunda vez. </li><li> Coloque el cable en el teclado y la abrazadera el otro extremo de la vena. Rellenar con unos pocos mL de Hanks para comprobar si hay fugas a lo largo de la cuerda. Retire los 5 ml y desconectar la abrazadera inferior. </li><li> Desconecte la jeringa de 20 cc. Retire el émbolo de la jeringa de 10cc. Conecte la jeringa de 10cc con aguja, se vierte en 10 ml de colagenasa y sustituir el émbolo. Impulsar la colagenasa en la vena hasta que vea la primera cantidad de salida del extremo abierto. Vuelva a sujetar el extremo abierto y se llenan de colagenasa hasta que haya distensión moderada de la vena. Demasiada distensión en la contaminación del músculo liso. </li><li> Masaje suavemente el cable. </li><li> Incubar cable (con pinzas hemostáticas, aguja y jeringa conectada) en DPBS a 37 ° C durante 15 min. </li><li> Mientras se incuba, siguen los pasos 1-8 con cable de 2 ª. </li><li> Después de la incubación, tomar el cable de vaso y mientras se mantiene el cable en el tubo de 50 ml cortar el extremo por encima de la abrazadera inferior. Asegúrese de recoger todo lo que en el tubo. Empuje la colagenasa restantes a través del cordón, a continuación, conecte la jeringa de 20 cc y empujar a través de Hanks con una presión moderada. </li><li> Si no hay células del músculo liso son necesarios, deseche el cable en este momento. De lo contrario, el cable del mismo en un segundo tubo de 50 ml con 5 ml de colagenasa ~ e incubar a 37 ° C durante 30-60 min. </li><li> Mantenga el tubo hasta que todos los cables se hacen. </li><li> Girar los tubos a ~ 1200 rpm durante 5 min. </li><li> Aspirar el sobrenadante (a excepción de ~ 1.2 ml). Resuspender el precipitado en 5ml PHEC + y la placa en un T25. </li><li> Se incuba a 37 ° C con 5% de CO 2 durante la noche. </li><li> Día siguiente se retira el sobrenadante y vuelva a colocar con medio fresco. Si hay muchos glóbulos rojos, lavar una vez con M199, a continuación, agregar + PHEC. Continuar la incubación de la forma habitual hasta que la placa es confluente (1-4 días). Dividido en un gelatinizada T75. </li><li> Una vez que T75 es confluente, se dividió en tres T75s. Congelar dos viales por frasco. </li></ol> Nota: Las células endoteliales (activado) tienen un aspecto de adoquín. Las células endoteliales son activadas a veces (larga y puntiaguda) a la derecha después de su aislamiento, después de un par de pases que por lo general regresan a un estado unactive. Limpieza <ol><li> Con mucho cuidado, deshacerse de las agujas en el contenedor de objetos punzantes. </li><li> Deseche las jeringas en un recipiente grande de riesgo biológico. </li><li> Ponga todos los tejidos en la bolsa de riesgo biológico pequeños. Cierre la bolsa y se congelan a -20 º C hasta que la incineración. </li><li> Ponga todos los instrumentos en virucida por lo menos 10 min. </li><li> Añadir medio de incubación de los residuos / lejía vaso. Deje reposar por lo menos 10 min. </li><li> Deseche las pastillas de banco en los residuos de riesgo biológico. </li><li> Rocíe el interior y exterior de los vasos, mesa de trabajo y la tapa del baño de agua con vircide. Deje reposar 10 minutos y luego limpie. </li><li> Enjuague los vasos y los instrumentos con agua tibia y pasar sobre una rejilla para secar (blot de los instrumentos para que no se oxidan). </li><li> Deshágase de los desechos descontaminados por el fregadero. </li><li> Volver medios no utilizados a la nevera. </li><li> Deseche los guantes de residuos biopeligrosos. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Colagenasa al 0,1 % </td><td></td><td></td><td>10 mL por cordón, calentado a 37 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>Frascos para cultivo de tejidos</td><td></td><td></td><td>T75, uno por cordón.</td></tr><tr><td>Medio Hanks</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tijeras</td><td></td><td></td><td>estériles</td></tr><tr><td>Vaso de precipitados</td><td></td><td></td><td>estéril</td></tr><tr><td>Tubos de 50 mL</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

el aislamiento de las células endoteliales de vena umbilical (huvec)

Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)

La angiogénesis es un complejo proceso de múltiples pasos, donde en respuesta a estímulos angiogénicos, nuevos vasos son creados a partir de los vasos existentes. Estas medidas incluyen: la degradación de la membrana basal, proliferación y migración (brotes) de las células endoteliales (CE) en la matriz extracelular, la alineación de la CE en los cables, la formación del lumen, anastomosis y la formación de una nueva membrana basal. Muchos de los ensayos in vitro se han desarrollado para estudiar este proceso, pero la mayoría sólo imitar ciertas etapas de la angiogénesis, y morfológicamente los vasos a menudo no se parecen a los barcos en vivo. Aquí se demuestra una optimización en el ensayo de angiogénesis in vitro que utiliza la vena umbilical humana CE y los fibroblastos. Este modelo recapitula todas las etapas clave al comienzo de la angiogénesis, y sobre los vasos pantalla lúmenes patente intercelular rodeado de polarización CE. Los buques pueden ser fácilmente observados por contraste de fases y microscopía lapso de tiempo, y se recuperó en forma pura para aplicaciones posteriores.

Este protocolo de vídeo ilustra el aislamiento y cultivo de las células endoteliales de vena umbilical (HUVEC) de cordón umbilical humano. Una vez aisladas estas células se pueden utilizar en los ensayos de la angiogénesis in vitro, como el gel de fibrina Optimizado ensayo de bolas también se demuestra por el laboratorio de Hughes.

El aislamiento de las células endoteliales de vena umbilical (HUVEC)

La angiogénesis es un proceso complejo de múltiples etapas en el cual, como respuesta a estímulos angiogénicos, se crean nuevos vasos a partir de la vasculatura existente. Estas etapas...

Hola, me llamo Jager Davis y hoy les mostraré cómo aislar células endoteliales de la vena umbilical humana, también conocidas como ic. Utilizaremos una variedad de medios, comenzando con la solución salina balanceada de Hank, que servirá para limpiar nuestras células de cualquier glóbulo rojo u otros contaminantes que puedan estar presentes en la vena. En segundo lugar, usaremos colagenasa resuspendida en DPBS, y esta solución se empleará para desprender nuestras ubic de la vena, y luego las sembraremos en medio con efecto al 20%, que es M199 con FBS activado por calor y solución de penicilina-estreptomicina.También estaremos suplementando nuestra suspensión de Resus con suplemento para el crecimiento de células endoteliales de BD Biosciences. Bien, tengo un par de tijeras de disección. Voy a hacer un corte recto a través del cordón así.A continuación, voy a proceder a limpiar el cordón. Entonces, lo que voy a hacer es identificar las arterias y la vena. Hay dos arterias y una vena.Suelo identificar las arterias de a dos. Están saliendo hacia usted. Entonces tenemos una aquí y otra arteria justo aquí.Y como puede observarse, la vena en realidad va hacia el cordón, y allí es donde c

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Investigación

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Biología

El cordón umbilical se utilizan para aislar las células musculares lisas de diferentes maneras. En este trabajo se utilizó el tratamiento enzimático de células aisladas de músculo liso.

El aislamiento de los Derechos Humanos de la arteria umbilical células musculares lisas (HUASMC)

Ofrecemos un método para aislar y cultivar las poblaciones puras de células endoteliales de la válvula del corazón (VEC). VEC puede ser aislada de uno y otro lado de la cúspide o el prospecto e inmediatamente después, las células intersticiales de base (CIV) aislada es muy sencillo.

Aislamiento de células endoteliales valvular

Este primer artículo se describe un procedimiento para aislar las células endoteliales humanas de las venas umbilicales y, a continuación se muestra cómo utilizar estas células para examinar la transmigración de neutrófilos bajo condiciones de flujo. Mediante el uso de una cámara de flujo de bajo volumen hecha de un polímero con las características ópticas de vidrio, en vivo de células de imagen fluorescente de poblaciones celulares raras también es posible.

Aislamiento de células endoteliales de vena umbilical y su uso en el Estudio de la transmigración de neutrófilos bajo condiciones de flujo

Se presenta un método de cuantificación de la adhesión de neutrófilos. Este método crea un ambiente de flujo dinámica similar al que se encuentra en un vaso sanguíneo. Se permite la investigación de la adhesión de neutrófilos a cualquiera de las moléculas de adhesión purificadas (ligando) o sustrato de células endoteliales (HUVEC) en un contexto similar al entorno in vivo con el estrés pura.

Ensayo de adhesión de neutrófilos Cámara de flujo humano

Este protocolo está preparado para compartir nuestro método de aislamiento de células endoteliales coronarias de ratón con fines de obtención de imágenes o para realizar experimentos de biología molecular.

Aislamiento de células endoteliales de ratón coronaria

Se detallan los protocolos para el cultivo de células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC), la transfección transitoria de marcadores de crecimiento de microtúbulos marcados con fluorescencia, la obtención de imágenes de células vivas y el análisis automatizado de la dinámica de crecimiento de microtúbulos en interfase.

-Alta resolución de imagen de lapso de tiempo y análisis automatizado de los microtúbulos en la dinámica de estar umbilical humana Las células endoteliales de vena

El objetivo de este protocolo es aislar las células progenitoras endoteliales de cordón umbilical. Algunas de las aplicaciones incluyen el uso de estas células como un biomarcador para identificar pacientes con riesgo cardiovascular, tratamiento de enfermedades isquémicas, y construye creando ingeniería de tejido vascular y del corazón la válvula.

Aislamiento de células endoteliales progenitoras de la sangre de cordón Umbilical humano

Aquí, presentamos un protocolo integrado que mide la subpoblación de monocito tráfico bajo flujo in vitro por el uso de marcadores de superficie específicos y microscopía de fluorescencia confocal. Este protocolo puede utilizarse para explorar medidas de reclutamiento secuencial así como a otros subtipos de leucocitos usando otros marcadores de superficie específicos del perfil.

Estudio simultáneo de la contratación de las subpoblaciones de monocitos bajo flujo In Vitro

Aunque es un desafío, el aislamiento de las células endoteliales pulmonares es esencial para los estudios sobre la inflamación pulmonar. El presente protocolo describe un procedimiento para el aislamiento de alto rendimiento y alta pureza de células endoteliales macrovasculares y microvasculares.

Aislamiento y purificación de células endoteliales microvasculares y macrovasculares a partir de muestras derivadas de pulmón

El presente estudio describe un protocolo para monitorizar los cambios en las células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVECs) durante la infección viral utilizando un sistema de análisis celular en tiempo real (RTCA).

Monitorización de los cambios en las células endoteliales de la vena umbilical humana tras la infección viral mediante el análisis celular en tiempo real basado en la impedancia

Describimos un protocolo para aislar y cultivar células endoteliales de venas safenas humanas (hSVECs). También proporcionamos métodos detallados para producir esfuerzo cortante y estiramiento para estudiar el estrés mecánico en hSVEC.

Aislamiento de células endoteliales de venas safenas humanas y exposición a niveles controlados de esfuerzo cortante y estiramiento

Aprende a aislar células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC) para estudios de angiogénesis in vitro. Este protocolo detalla el uso de solución salina de Hank y colagenasa para obtener células viables.

El aislamiento de las células endoteliales de vena umbilical (HUVEC)

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