Ensayo XTT: un ensayo colorimétrico para evaluar la viabilidad celular y la actividad mitocondrial

- Las ondas ultrasónicas de baja frecuencia conducen a la lisis selectiva de las células de leucemia humana y el ensayo XTT ayuda a determinar el grado de este daño. El ensayo se basa en el principio de que las enzimas mitocondriales de las células sanas convierten un tinte XTT amarillo en un compuesto anaranjado llamado formazán. Para comenzar el ensayo, trate las células con metilbeta-ciclodextrina, un agente que agota el colesterol, y posteriormente sonique las células a baja potencia para inducir daño celular.

Centrífuga para peletizar las células y agregar medios de crecimiento celular frescos al pellet. Siembre las células en la concentración deseada en una microplaca de pocillos múltiples e incube durante la noche. Ahora, agregue la solución XTT activada a las células e incube hasta que se desarrolle el color naranja en los pocillos de la microplaca. Coloque la placa en un espectrofotómetro. Mida la absorbancia de 450 a 500 nanómetros y luego de 630 a 690 nanómetros. Reste los dos valores para obtener resultados precisos. El valor más alto de la absorbancia en el ensayo XTT indica una mayor actividad de las enzimas mitocondriales y una mayor viabilidad celular.

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