Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:24 min. • April 30th, 2023
- La bromodeoxiuridina o BrdU es un análogo sintético de nucleósidos de timidina. Durante la fase de síntesis del ciclo celular, el BrdU sustituye a la timidina y se integra en el ADN recién sintetizado. El BrdU incorporado permite el seguimiento de la progresión del ciclo celular. Para detectar el BrdU incorporado, primero hay que fijar y permeabilizar las células para hacerlas permeables.
A continuación, trate las células con la enzima ADNasa para escindir las hebras de ADN y exponer el BrdU incorporado. Posteriormente, agregue un anticuerpo anti-BrdU marcado con fluorescencia adecuado. El anticuerpo entra en el núcleo y se une fácilmente al BrdU expuesto presente en el ADN.
Además, trate las células con un tinte fluorescente adecuado de unión al ADN. El tinte se une al ADN, lo que permite cuantificar el contenido total de ADN. Utilice la citometría de flujo para detectar la fluorescencia tanto del BrdU marcado como del ADN.
Las intensidades de fluorescencia del ADN marcado diferencian las células en diferentes fases del ciclo celular en función de la variación en el contenido total de ADN. La señal fluorescente de BrdU identifica la posición actual del ciclo celular de las célul
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