Clasificación de células leucémicas basadas en columna G-10: un método para purificar células de leucemia linfoblástica aguda a partir de células estromales de médula ósea

- Para empezar, agregue tripsina a una placa que contenga células de leucemia cocultivadas con células estromales de la médula ósea para la disociación celular. Centrifugar y volver a suspender el pellet utilizando medios precalentados para mantener la viabilidad de la celda. La columna G-10 contiene perlas de dextrano reticulado que se hinchan en el agua para formar una matriz de gel.

Equilibre la columna G-10 con medios precalentados para llenar el espacio entre las cuentas, asegurando una elusión lenta de los medios de la columna. Mantenga una temperatura adecuada en la columna para evitar la formación de burbujas de aire. Cargue la mezcla de celdas lentamente en las perlas de gel en la columna G-10. Incubar las celdas en la columna G-10 a temperatura ambiente durante el tiempo deseado. Según las características y el tamaño de la superficie celular, las perlas de gel restringen preferentemente las células estromales más grandes de la médula ósea, lo que permite la separación de las células leucémicas.

Agregue medios precalentados a la columna y recoja la suspensión de células leucémicas. Centrifugar la suspensión celular y volver a suspender el pellet en un tampón adecuado. Utilice la población pura de células leucémicas para realizar análisis más detallados. En el siguiente ejemplo, separaremos una población pura de células de leucemia del cocultivo estromal utilizando la columna G-10.

- Con la llave de paso completamente cerrada para cada subpoblación, use una pipeta de 1000 microlitros para agregar todo el volumen de 1 mililitro de celdas, gota a gota, en la parte superior de una de las columnas G-10 preparadas, asegurándose de que las celdas permanezcan en la parte superior o dentro del pellet G-10. Deje que las células se incuben en el pellet G-10 durante 20 minutos a temperatura ambiente. Luego, agregue de 1 a 3 mililitros de medio fresco precalentado a la columna y abra la llave de paso para que el medio salga lentamente de las columnas gota a gota.

Continúe agregando medio precalentado a las columnas en incrementos de 1 a 2 mililitros. Cuando se haya recolectado un total de 15 a 20 mililitros de células leucémicas, cierre la llave de paso y tape el tubo de recolección. A continuación, gire las células hacia abajo y vuelva a suspender el pellet en el búfer de análisis posterior adecuado.