Muestreo de sangre retroorbital: un método para aislar células mononucleares del seno retroorbital de un ratón

- Primero, sostenga un ratón anestesiado por el cuello y protruya el ojo. Inserte un tubo capilar fino en el canto medial del ojo. Permita que la sangre fluya por acción capilar hacia un tubo. Transfiera la sangre a un tubo recubierto de EDTA y manténgalo en hielo. El EDTA se une a los iones de calcio, evitando la coagulación de la sangre. Una temperatura más baja reduce la actividad glucolítica de las células y las posibilidades de contaminación microbiana.

A continuación, diluya la sangre con un tampón que contenga EDTA y mezcle bien. Agregue con cuidado una capa de una solución separadora adecuada en el fondo, sin alterar la sangre. Centrifugar la suspensión. El polímero en la solución de separación agrega los glóbulos rojos y los sedimentos en el fondo. Las células mononucleares y las plaquetas, al ser más ligeras que el polímero, se depositan por encima del gradiente polimérico.

Retire la capa superior que contiene plasma y recoja el anillo blanco opaco que contiene células mononucleares. Diluya las células con PBS y centrífuga para eliminar el plasma y las plaquetas residuales. Utilice las células mononucleares aisladas para un análisis posterior. El siguiente protocolo demos