Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:12 min. • April 30th, 2023
- La tinción de May-Grunwald Giemsa, o MGG, es un procedimiento de dos pasos para la tinción diferencial de células de médula ósea, o BMC. Para comenzar a teñir, obtenga un frotis concentrado de una sola capa de BMC en un portaobjetos de vidrio. Deja que la mancha se seque al aire. Trate primero las células con tinción de May-Grunwald que contenga eosina y azul de metileno disueltos en metanol.
El disolvente metanol fija inicialmente las células. El azul de metileno, un colorante básico con una carga positiva neta, tiñe los componentes celulares ácidos como los ácidos nucleicos. La eosina, un colorante ácido con una carga negativa neta, tiñe componentes celulares básicos como las proteínas catiónicas citoplasmáticas. Trate las células con una solución tampón de pH 6,8 para permitir que el tinte precipite y se adhiera bien a los materiales celulares.
Además, trate las células con tinción de Giemsa, que también contiene tintes ácidos y básicos, para mejorar el efecto general de la tinción. Los tintes básicos, azul celeste y azul de metileno, intensifican la tinción de los componentes ácidos, mientras que el colorante ácido, eosina, aumenta la tinción de los componentes básicos.
Bajo un microscopio, los eritrocitos aparecen de color marrón rosado y las plaquetas como pequeños puntos púrpuras. Los granulocitos muestran un núcleo multilobulado de color azul púrpura y un citoplasma granulado de color rojo. Los agranulocitos aparecen de color azul claro con un gran núcleo de color rosa púrpura. En el siguiente protocolo, mostramos la tinción con MGG de las células de la médula ósea.
- Para preparar las células de la médula ósea para la tinción, primero coloque las diapositivas en cámaras desechables con tarjetas de filtro preconectadas y coloque las cámaras en una citocentrífuga. Agregue 100 microlitros de tampón FACS a cada cámara de tarjeta de filtro y centrifugue brevemente los portaobjetos. Al final del centrifugado, agregue 100 microlitros de células a cada cámara y centrifugue las células.
Luego, retire con cuidado los portaobjetos de las cámaras para que se sequen al aire. Para teñir las células de la médula ósea, sumerja los portaobjetos en un frasco de Coplin que contenga la solución de May-Grunwald durante 5 minutos. A continuación, transfiera los portaobjetos a un frasco de solución tampón con un pH de 6,8 durante 1 minuto. A continuación, transfiera los portaobjetos a la solución Giemsa R durante 10 minutos, seguido de un lavado de 10 segundos con agua de pH neutro.
Después del lavado, deje que los portaobjetos se sequen al aire y aplique una gota de medio de montaje a cada muestra. Luego, coloque un borde de un cubreobjetos en el portaobjetos y baje con cuidado el cubreobjetos sobre las celdas, presionando suavemente para eliminar las burbujas de aire.