Centrifugación en gradiente de densidad: un método para aislar células de LLC de sangre periférica

- En los pacientes con leucemia linfocítica crónica o LLC, los linfocitos B aumentan significativamente en la médula ósea y la sangre. Para aislar estas células de LLC de una muestra de sangre, primero trate la muestra con un cóctel de enriquecimiento de células B humanas que separa las células B mediante selección negativa. Los anticuerpos del cóctel reconocen y entrecruzan específicamente los antígenos expresados por las células no B y los eritrocitos, formando complejos densos.

A continuación, coloque la muestra en capas sobre un medio de gradiente de densidad que tenga una densidad óptima para el aislamiento de linfocitos. Con la centrifugación posterior, los diferentes componentes de la sangre se separan en función de las variaciones en sus densidades en relación con el medio de gradiente. Los complejos de células RBC no B con densidades más altas se asientan a través del medio, formando un pellet. La fracción de plasma menos densa forma la capa superior. Las células CLL menos densas forman una capa blanca en la interfaz del medio de densidad plasmática.

Transfiera con cuidado la capa blanca a un tubo nuevo. Vuelva a centrifugar para obtener un pellet que contenga células CLL