Preparación de fracciones subcelulares a partir de células leucémicas: un método para generar fracciones celulares y nucleares a partir de células leucémicas

- En las células leucémicas, el transporte de macromoléculas, como algunas proteínas supresoras de tumores entre el núcleo y el citoplasma, está desregulado. La mala localización de estas proteínas las hace inactivas, lo que resulta en el crecimiento descontrolado de células leucémicas. Podemos determinar la localización aberrante de dichas proteínas mediante la generación de la fracción citoplasmática y nuclear de células leucémicas.

Comience tomando el volumen deseado de células leucémicas en un tubo de microfuga y centrífugo para granular la célula. Vuelva a suspender el pellet en un tampón de lisis hipotónica y luego agregue la concentración deseada de detergente. El tampón de lisis hipotónica hace que las células se hinchen y rompan la membrana plasmática, dejando intacta la membrana nuclear, aislando así las fracciones citoplasmáticas. El detergente ayuda en la extracción de proteínas de los orgánulos citoplasmáticos.

Centrifugar las células lisadas en suspensión y transferir el sobrenadante a un tubo nuevo. El sobrenadante contiene la fracción citoplasmática de la célula. Para preparar la fracción nuclear, vuelva a suspender el pellet restante en el tampón de lisis completo