Cultivo y recolección de clones de HSPC: un método para obtener los clones de HSPC clasificados individualmente

- Células madre y progenitoras hematopoyéticas o HSPC, pueden autorrenovarse y diferenciarse en varios tipos de células sanguíneas. Las HSPC acumulan gradualmente mutaciones en el ADN a lo largo de su vida, lo que puede contribuir a la leucemia. Para analizar este tipo de mutaciones, las HSPC se generan normalmente a partir de la médula ósea.

Comience por agregar anticuerpos conjugados con fluoróforos a las células mononucleares (células madre adultas aisladas de la médula ósea) e incubarlas durante el tiempo deseado. Los anticuerpos se unen a marcadores específicos de la superficie celular, como CD34. Ahora, cargue la mezcla en la máquina de citometría celular activada por fluorescencia o FACS.

Los anticuerpos conjugados con fluoróforos emiten fluorescencia cuando son golpeados por el láser. Las gotas de células individuales pasan a través del detector que mide la intensidad de fluorescencia, en función de la cual la gota posee una carga eléctrica. En presencia de campos electromagnéticos, las células cargadas positivamente se mueven al contenedor negativo y viceversa.

Ahora, cultive las HSPC positivas para CD34 clasificadas por FACS en un medio adecuado durante el tiempo deseado