Clasificación de células activadas magnéticamente: un método para aislar células C-Kit positivas

- c-Kit, o CD117, es un receptor transmembrana de tirosina cinasa expresado por células madre hematopoyéticas o progenitoras presentes en la médula ósea y la sangre. También es un marcador para la detección de la leucemia mieloide aguda.

Para aislar las células c-Kit positivas, recoja los huesos murinos de las piernas y tritúrelos para liberar la médula desde el interior. Filtre la suspensión de médula ósea para eliminar cualquier fragmento de hueso. Coloque el filtrado que contiene células de médula ósea en un medio de gradiente de densidad y centrifuga para separar las células mononucleares de otras fracciones.

Recoja la capa turbia de células mononucleares en un tubo que contenga microperlas conjugadas con anticuerpos anti-CD117 de ratón. Incubar para que los complejos anticuerpo-perlas se unan a los receptores CD117 en las células c-Kit positivas. Pase la suspensión incubada a través de una columna magnética colocada en un campo magnético. Todas las células positivas del c-Kit marcadas con las microperlas magnéticas permanecen en la columna, mientras que las células no marcadas pasan a través de ella.

Retire la columna del campo magnético y enjuague el contenido con un tampón a