Selección inmunomagnética negativa: un método para purificar células B a partir de células mononucleares de sangre periférica

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Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC, por sus siglas en inglés) incluyen las células B, las células T, las células asesinas naturales o NK y los monocitos. Las células B producen moléculas de inmunoglobulina para combatir las infecciones. En la leucemia, estas células se multiplican y hacen metástasis en diferentes órganos.

Para aislar las células B, comience con una suspensión de PBMC aisladas y agregue una mezcla de anticuerpos primarios dirigidos contra moléculas específicas de la superficie celular llamada grupo de diferenciación o CD. Los anticuerpos específicos se unen a la molécula CD-3 en las células T, a la molécula CD-14 en los monocitos y a la molécula CD-16 en las células NK, dejando a las células B sin etiquetar.

A continuación, lave la muestra para eliminar los anticuerpos no unidos. Agregue microesferas magnéticas secundarias conjugadas con anticuerpos a la muestra. Los anticuerpos secundarios se unen a la región FC de los anticuerpos primarios unidos a células específicas. Coloque el tubo que contiene la suspensión celular marcada bajo la influencia de un campo magnético. En el campo, las células marcadas magnéticamente migran y se unen a la pared del tubo, lo que lleva a la selección negativa de las células no deseadas. Recoja el sobrenadante que contiene células B enriquecidas en un tubo de recolección nuevo.

En este protocolo, realizaremos una selección inmunomagnética negativa de linfocitos B leucémicos de PBMCs de pacientes con leucemia linfocítica crónica.

Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender 10 millones de PBMC en un mililitro de tampón de aislamiento, que es PBS con 0,1% de BSA y 2 milimolares de EDTA, con el pH ajustado a 7,4. Los linfocitos de LLC ahora necesitan ser purificados a partir de las preparaciones de PBMC. A continuación, se añaden 10 microgramos de anticuerpos primarios monoclonales anti-CD-3, CD-14 y CD-16 de ratón, y se incuba durante 30 minutos a 4 grados centígrados.

Después de lavar las células con el tampón de aislamiento y centrifugar a 500 veces g durante 5 minutos a 4 grados centígrados, vuelva a suspender los 10 millones de PBMC en 1 mililitro de tampón de aislamiento. Incubar las células resuspendidas con 100 microlitros de perlas magnéticas lavadas durante 30 minutos a 4 grados centígrados con una resuspensión suave. A continuación, coloque el tubo en el soporte del imán durante dos minutos y transfiera el sobrenadante con las células no unidas a un tubo nuevo con una pipeta de 5 mililitros. Después de este paso, los linfocitos CLL purificados están listos para ser utilizados.

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Last updated: 1 August 2026