Metabolismo extracelular de las purinas: un ensayo basado en HPLC para medir la generación y el metabolismo de adenosina en células leucémicas

- La adenosina, un nucleósido de purina presente en concentraciones nominales en el espacio extracelular, ayuda a controlar la proliferación celular en condiciones fisiológicas. Durante condiciones patológicas como la leucemia, la concentración extracelular de adenosina aumenta e inhibe las respuestas inmunitarias contra las células cancerosas. La acumulación de adenosina es el resultado de la desfosforilación de nucleótidos ATP o ADP, o debido a una degradación alterada de la adenosina a nucleósido de inosina.

Para medir la generación y el consumo de adenosina, se cultivan células cancerosas en presencia de un sustrato de nucleótidos. La actividad metabólica de las células con adenosina determina las concentraciones de varias moléculas de purina presentes en el cultivo. Centrífuga para eliminar las células y obtener moléculas de purina en el sobrenadante.

Para separar y cuantificar las purinas, transfiera la muestra a los viales adecuados. Cárguelos en una columna de fase reversa, cromatografía líquida de alta resolución o RP-HPLC, que contenga una fase estacionaria inmovilizada con ligandos hidrofóbicos. Al pasar a través de la columna, las moléculas hidrofóbicas se adsorben a lo