Ensayo de población lateral: un método para aislar la población lateral de células tumorales del pez cebra

- El tratamiento quimioterapéutico para los tumores generalmente se dirige a las células altamente proliferativas, dejando atrás un pequeño subconjunto de la población de células madre, lo que lleva a la recapitulación del tumor. Estas células madre se denominan población secundaria. Dado que la población lateral carece de marcadores celulares específicos, utilizamos un ensayo de eflujo de colorante para aislarlos de otras células tumorales.

Para empezar, añade el tinte de Hoechst a las células tumorales aisladas del pez cebra. Hoechst entra en el núcleo y se une a la región rica en A-T en el surco menor del ADN. La población lateral de las células tiene una mayor concentración de transportadores ABC en la superficie, lo que conduce a un rápido flujo de colorante fuera de la célula, mostrando una baja fluorescencia.

Tome otro frasco de células tumorales tratadas con Hoesct y agréguele verapamilo. Este vial actúa como control, ya que el verapamilo bloquea los transportadores ABC causando una reducción en el flujo de Hoechst, por lo tanto, aumentando la fluorescencia en la población lateral.

Incubar tanto las células de control como las de muestra en la oscuridad. A continuación, con