Pseudofracture: Un Modelo periférica aguda trauma tisular

Cuando se fractura un hueso largo, como el fémur o la tibia, el músculo y el tejido blando lesionados quedan expuestos a fragmentos óseos y médula ósea dañados. A esto le sigue una fuerte respuesta inmunitaria para ayudar en la reparación de los tejidos. Un modelo para estudiar los efectos de esta exposición se puede generar mediante la recolección de fémures y tibia.

De un ratón donante. Los huesos se trituran para crear una solución ósea, que luego se inyecta en el muslo lesionado de un ratón receptor. A continuación, se monitorizan las respuestas inmunitarias y se evalúan las lesiones de órganos remotos para estudiar los efectos a largo plazo del traumatismo inducido por fracturas.

La principal ventaja de esta técnica sobre los métodos existentes de trauma tisular periférico, como el modelo de fractura bilateral de fémur, es que este modelo, el modelo de pseudofractura, permite la supervivencia a largo plazo sin complicaciones de anestesia prolongada o técnicas de fijación de fracturas complejas, y por lo tanto permite el estudio de las respuestas inmunes a corto plazo después del traumatismo. Antes de comenzar el procedimiento, prepare los siguientes suministros: una cubeta de hielo, instrumentos quirúrgicos Betadine, hemostáticos GRE, pinzas de mortero, agujas de calibre 20, una jeringa de un CC, anestesia PBS y un cono nasal de flúor. Una sola coincidencia de edad y peso eutanasiada.

El ratón donante genético debe proporcionar suficiente material para tres receptores. Pega al donante con cinta adhesiva a una tabla de plexiglás, asegurándote de pegar las extremidades inferiores solo en la punta del pie. Afeita cuidadosamente las extremidades inferiores.

A continuación, cúbralos completamente con Betadine y alcohol para la esterilidad para eliminar los huesos largos de la extremidad inferior, hacer una incisión quirúrgica en la piel en la región inguinal y continuar cortando la piel a lo largo de la extremidad hasta el tobillo, retraer la piel y diseccionarla lejos de la facia y el músculo subcutáneos, tanto en el aspecto medial como en el lateral. A continuación, inserte una hoja de las tijeras debajo de los músculos que se encuentran anterior y lateral a la tibia. Deslice la cuchilla proximal y distalmente para levantar los músculos limpiamente lejos del hueso subyacente.

Repita esta técnica en la parte inferior posterior y medial de la tibia para separar los músculos debajo de la tibia. Se debe usar un esfuerzo adicional mínimo en el lado posterior al deslizarse distalmente para separar el peroné de la tibia en el extremo proximal de estos músculos de la pierna. Corte los tendones lo más cerca posible de sus inserciones y retraiga los músculos distalmente mientras tira del grupo muscular juntándolo De manera descendente, un pequeño tirón liberará las inserciones distales de la articulación del tobillo con unas tijeras cortadas a través de la articulación del tobillo.

No separe la tibia del fémur en este punto, esta conexión proporciona un apalancamiento adicional que ayudará en la disección del fémur de la articulación de la cadera. Use una técnica similar para liberar los músculos del fémur. Realice esto posteriormente y tanto medial como lateralmente si es necesario.

Corta la inserción distal de estos grupos musculares para liberarlos de la articulación de la rodilla. Extienda la incisión en la piel según sea necesario para lograr una exposición adecuada y siga por debajo de los músculos. Para diseccionar el extremo del fémur de la articulación de la cadera, retire el fémur y conecte la tibia del ratón donante y colóquelos en una gasa estéril.

Separe los dos huesos en la articulación de la rodilla simplemente agarrando cada hueso con una mano separada y girando o girando suavemente los dos huesos en direcciones opuestas a lo largo de sus largos AE. Para quitar los tendones restantes de los huesos largos, envuelva una gasa de cuatro por cuatro alrededor de la longitud del hueso. Sujételo con fuerza y raspe toda la longitud de los huesos varias veces para eliminar los tejidos restantes de la superficie.

Coloque los huesos recolectados en un tubo estéril de 1,5 mililitros sobre hielo. Transportar los huesos del donante a un armario de seguridad biológica completamente desinfectado. Para la preparación de la solución ósea.

La campana debe prepararse con un apósito de campo estéril, un mortero estéril, un par de pinzas estériles, un tubo estéril de ocho mililitros PBSA estéril de un mililitro pipeta con las puntas de pipeta respectivas. Un hombre de pipeta de 100 microlitros con sus respectivas puntas, jeringas de un mililitro y agujas de calibre 20 con las pinzas, transfiere los huesos al mortero y usa el mortero para triturar suavemente los huesos. Pipetear un mililitro de PBS en el mortero y continuar triturando los fragmentos restantes con movimientos circulares para asegurar una suspensión completa del resus.

Luego agregue otro mililitro de PBS y continúe triturando para crear la solución de hueso, que debe tener un tono rosado. Vierta lentamente la solución del mortero en el tubo de ocho mililitros mientras se asegura de que queden los restos más grandes. Transfiera la solución ósea a una jeringa de un mililitro.

Con una aguja de calibre 20, la solución ósea debe permanecer en hielo. Pipetee un microlitro de la solución ósea en una placa de congar Mac extendiéndola uniformemente sobre la superficie. Incubar la placa durante 24 a 48 horas para asegurar la esterilidad.

Comience el procedimiento quirúrgico para la lesión de tejidos blandos y la inyección de solución ósea evaluando la profundidad de la anestesia de un ratón anestesiado pentabarbital por dedo del pie. Pellizcar. Coloque el ratón en posición supina sobre un tablero de plexiglás e inmovilice al animal envolviendo sin apretar tiras delgadas de cinta adhesiva alrededor de la parte distal de cada extremidad con una maquinilla Oscar a five con una cuchilla de tamaño 40. Afeita las regiones abdominal, inguinal y del muslo del animal.

Transfiera el ratón al campo quirúrgico estéril. Limpie el área quirúrgica con Betadine. A continuación, limpie con alcohol para esterilizarlo.

Coloque un cono de nariz en el ratón que contenga un trozo de gasa con un mililitro de 99% de flúor. Una vez que las respiraciones del animal comiencen a disminuir, retire el cono de la nariz. Si se requiere anestesia adicional a lo largo de cualquier parte del procedimiento, se puede inyectar pentobarbital adicional o se puede administrar flúor.

A continuación, dobla un apósito de campo estéril y colócalo sobre el ratón para permitir la exposición solo de las extremidades inferiores y la cabeza. Esta lesión de tejidos blandos es una lesión bilateral por aplastamiento de las extremidades traseras. Asegúrese de que el ratón esté colocado con las extremidades traseras ligeramente abducidas y giradas lateralmente.

Esto ayuda en el acceso al músculo correcto. Agrupe los flexores de la rodilla para realizar la lesión por aplastamiento: Pinje un hemostático grande de 18 centímetros alrededor de la musculatura posterior del muslo, punto medio a lo largo del fémur, con su curva convexa hacia el fémur. Bloquee el hemostático con el primer clic solo durante 30 segundos.

Inserte la aguja a través de la piel de dos a tres milímetros mientras la punta del bisel toca el fémur. Inyecte 0,15 mililitros de la solución ósea en la musculatura del muslo triturada a cada lado. Retire la aguja y coloque rápidamente un dedo enguantado estéril sobre el sitio de la inyección para detener cualquier reflujo de solución ósea fuera de la herida.

Mantenga este dedo allí durante varios segundos. Vuelva a colocar al ratón en la jaula y permita total libertad de movimiento directamente mientras disminuye la anestesia. Apropiado. El manejo del dolor debe administrarse a medida que el ratón se despierta.

Este esquema general muestra la respuesta inmune bifásica después de un trauma en el punto de tiempo de hora cero. El trauma es inducido. A esto le sigue una respuesta hiperinflamatoria temprana que se puede ver que alcanza su punto máximo a las seis horas y se mide a través de la evaluación de la inflamación sistémica y la disfunción de órganos remotos.

El segundo componente de la respuesta inmunitaria postraumática es una inmunosupresión tardía medida por la disfunción de las células inmunitarias y se representa como un valle alrededor de las 48 horas. Este es un diagrama representativo de la respuesta inflamatoria de citocinas en plasma que ocurre temprano después del trauma y es un ejemplo de inflamación sistémica. Se ha encontrado que la disfunción orgánica remota, medida a través de la lesión hepática, se eleva dentro de un período de tiempo similar.

Este diagrama representativo es un ejemplo para resaltar la disfunción de las células inmunitarias después de un traumatismo. Al intentar este procedimiento, es importante recordar garantizar la esterilidad y la manipulación precisa durante todo el experimento. Este no es un modelo de fractura verdadera o de infección de la herida.