El grano y Pruebas de Manejo de Capellini: Simple medidas cuantitativas de la función de las patas delanteras diestro en ratas y ratones

Este video demuestra un procedimiento para cuantificar cuatro deficiencias en la destreza durante el manejo de alimentos. En roedores, cada animal se expone a trozos cortos de pasta cruda primero en su jaula de alojamiento y luego en el entorno de prueba. En el entorno de prueba, se graban en video los movimientos de las patas del animal durante la ingestión de la pasta. Los ajustes realizados con cada pata se identifican y cuentan durante la reproducción en cámara lenta del video.

Durante el análisis del video, se identifican comportamientos atípicos de manipulación. Los resultados identificados muestran cambios en cuatro indicadores de mala destreza tras una lesión cerebral o durante el envejecimiento, mediante la cuantificación de los movimientos utilizados para manipular alimentos durante la alimentación. Hola, soy Kelly Tenet del laboratorio de Teresa Jones en el Departamento de Psicología de la Universidad de Texas en Austin, y yo también soy RNAi del Laboratorio Jones.

Hoy vamos a mostrarles los procedimientos para la prueba de manipulación de Vermicelli en ratas y la prueba de manipulación CAPI en ratones. Utilizamos estos procedimientos en nuestro laboratorio para estudiar cómo cambia el uso de las cuatro P de Dexter durante la manipulación de alimentos tras una lesión cerebral o durante el envejecimiento. Así que comencemos.

Para preparar los trozos de pasta para la prueba, utilice un marcador de punta ultrafina para marcar la marca DeCheco, CAPI y la vermicelli de la marca Skinner a intervalos específicos con una plantilla de cartulina. Para capal, use incrementos de 0,86 centímetros y para vermicelli use incrementos de 1,75 centímetros. Esto facilita la visualización del movimiento del hilo de pasta.

Durante la alimentación, corte con una cuchilla de afeitar el capi en trozos de 2,6 centímetros de longitud para usar con ratones, y para ratas corte el vermicelli en trozos de siete centímetros de longitud. Debido a que las marcas de pasta varían en textura y diámetro, lo cual puede influir en la forma de manipulación, se recomienda utilizar una única fuente de pasta para pruebas repetidas con el fin de superar las respuestas neofóbicas y establecer destreza en el manejo. Exponga a los animales a los trozos de pasta en su jaula de alojamiento durante las semanas previas a la prueba. Una exposición de cinco a 10 días con aproximadamente cuatro piezas por animal cada vez es suficiente.

Incluso los animales habituados pueden mostrarse reacios a comer frente a la cámara. Por este motivo, coloque la cámara frente al área de prueba durante una o más sesiones de habituación. Una vez que los animales hayan estado expuestos a los trozos de pasta, colóquelos en el entorno de prueba y hábituelos a comer allí.

Por lo general, los animales comen fácilmente la pasta en este entorno. Después de tres a cinco sesiones de alimentación con los preparativos completos, veamos cómo administrar las pruebas de manejo de pasta en ratones y ratas. Las sesiones de prueba consisten en ensayos secuenciales con una porción de pasta consumida por ensayo.

Una sesión normalmente consiste en cuatro a cinco ensayos por rata y tres a cuatro ensayos por ratón. Las ratas suelen sentarse erguidas sobre sus cuartos traseros para comer pasta, y los tirones son más fáciles de observar. Con una cámara colocada aproximadamente al nivel del suelo de la cámara y con un ligero ángulo hacia arriba, los ratones tienden a inclinarse hacia adelante y sostener la pasta en un ángulo.

Por lo tanto, una cámara de prueba con un piso abierto se coloca encima de un espejo. La cámara se sitúa a un nivel ligeramente más alto que el piso e inclinada hacia abajo para enfocar el reflejo de las patas en el espejo. Antes de iniciar la grabación en video, coloque un trozo de pasta dentro de la cámara de prueba.

Para iniciar la alimentación y colocar al animal en un campo de visión adecuado de la cámara, el animal debe estar frente a la cámara y esta debe tener un acercamiento suficiente de 10 a 12 aumentos. Con el fin de observar ajustes individuales tanto en las cuatro patas como en todos los dedos, los nudillos de ambas patas deben ser visibles tan pronto como el animal y la cámara estén posicionados; inicie dejando caer o colgando un trozo de pasta directamente frente al animal y comience a grabar. Antes del inicio de la alimentación, cada mordisco del trozo de pasta es audible.

Por lo tanto, la grabación de audio es útil para verificar la alimentación. Continúe con los ensayos restantes. De la misma manera, es mejor minimizar el retraso entre ensayos para que los animales no se alejen de la posición óptima de observación.

Ahora veamos cómo realizar el análisis cuantitativo en video de cuatro ajustes deficientes y el tiempo de alimentación. El análisis de cuatro ajustes deficientes durante la alimentación es una medida cuantitativa sencilla que es sensible a los déficits laterales tras una lesión del SNC en ratas y a los cambios relacionados con la edad en ratones. Durante el análisis, la reproducción del video se ralentiza aproximadamente al 50 % del tiempo real, o se utiliza la avanzada cuadro por cuadro según sea necesario para identificar los ajustes. La porción cuantificada del ensayo comienza cuando el trozo de pasta se introduce por primera vez en la boca y termina cuando el último resto de pasta es liberado de los orificios y desaparece dentro de la boca.

Se cuenta un ajuste cada vez que el poro libera y vuelve a contactar la pieza anterior. Cuando hay una reconfiguración del agarre del poro o cuando ocurre una extensión, flexión o abducción de los dedos, cada ajuste se registra por separado para el poro izquierdo y derecho. No se cuentan los ajustes cuando el poro se desliza sobre la obra maestra sin movimiento de los dedos ni reposicionamiento del agarre de la mano.

También se dejan de contar los movimientos del pedazo cuando no está en contacto con la pieza de pastor. El tiempo dedicado a comer se registra en cada ensayo, comenzando con el inicio y finalizando cuando la pieza de pastor desaparece en la boca. Si el animal hace una pausa durante la alimentación pero mantiene el agarre sobre el pedazo, el tiempo de pausa se resta del tiempo total; de lo contrario, el ensayo se omite del análisis.

Si durante cualquier parte de la alimentación, la visión de la pausa queda obstruida o si el animal rompe el trozo, dado que los trozos más cortos alteran los patrones de manipulación, los ratones a veces sueltan la pasta durante la alimentación y, tras una breve pausa, la recogen y reanudan la alimentación. Esto puede deberse a una distracción o a una saciedad parcial. Si la alimentación se reanuda rápidamente, no omitimos estos ensayos, pero restamos del tiempo total de alimentación el tiempo en que los trozos caen.

Las mediciones obtenidas a partir del análisis de video son el número promedio de ajustes por poro, por pieza, el tiempo promedio de alimentación por pieza y la tasa de ajustes. Ahora veamos algunos patrones atípicos de manipulación. Los patrones atípicos de manipulación pueden distinguir entre diferentes tipos de lesiones del SNC y revelar cambios relacionados con la edad.

Y registrar estos comportamientos es útil como un análisis complementario. Los animales intactos suelen iniciar la alimentación con un extremo colocado más abajo en la pasta y el otro extremo cerca de la boca. El POS suele asumir las mismas posiciones en todos los ensayos.

En un comportamiento atípico, el animal puede intercambiar las posiciones de los dos miembros. En animales intactos, durante la alimentación, los poros adoptan posiciones más simétricas, colocándose uno al lado del otro o con los dedos entrelazados cuando el trozo es muy corto. Algunos animales con lesiones del SNC no logran hacerlo, sino que colocan los extremos juntos en una sujeción simétrica cuando los trozos anteriores eran largos.

Dos comportamientos atípicos adicionales en ratas y ratones son no tocar el trozo de pasta con un orificio durante un tiempo prolongado mientras comen y usar la boca para tirar de la pasta a través de los orificios con el fin de reposicionarla. Algunos comportamientos se consideran atípicos para las ratas, pero típicos en ratones, como la postura encorvada y soltar la pasta después de que comience la alimentación. Sin embargo, la frecuencia de caídas en ratones puede aumentar tras un daño en el SNC, por lo que resulta útil registrar la frecuencia de caídas en ambas especies.

Los ratones ancianos a menudo realizan ajustes que no resultan en el avance del fideo. Esto se cuenta cada vez que un ajuste no logra claramente un movimiento discernible del fideo hacia la boca. Ahora mostraremos algunos resultados de las pruebas de manipulación.

Los análisis realizados en ratas con lesiones corticales sensoriomotoras indican que los animales realizan menos ajustes con la extremidad contralateral a la lesión en comparación con la ipsilateral. La oclusión unilateral de la arteria cerebral media provoca tanto una disminución en los ajustes con la extremidad contralateral como un aumento en comportamientos atípicos de manipulación. Los análisis de video en ratones muestran que los animales mayores tardan más en comer los trozos de pasta y realizan más ajustes que no resultan en el avance de la pasta hacia la boca, en comparación con ratones adultos jóvenes.

Acabamos de mostrarle cómo cuantificar los comportamientos de manipulación de espagueti en ratas y ratones. Al realizar este procedimiento, es importante recordar verificar la confiabilidad entre evaluadores para asegurarse de que los ajustes del espagueti se identifiquen con precisión. Eso es todo.

Gracias por ver este video y buena suerte con sus experimentos.