Reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa para enumerar bacteriófagos

Prepare la premezcla de qPCR para 10 muestras de fagos biopanned de concentración desconocida y 7 muestras de concentraciones estándar por triplicado, lo que da como resultado una premezcla para 51 muestras que contienen 255 microlitros de qPCR Master Mix, 51 microlitros de cebadores y 102 microlitros de agua.

Alícuota 8 microlitros de la mezcla de PCR preparada en 51 pocillos de una placa de qPCR de 96 pocillos. A continuación, añada dos microlitros de muestras de fagos T7 tratadas térmicamente a cada uno de estos pocillos, dispensándolas por debajo de la superficie de la premezcla de qPCR. Con una película adhesiva, selle la placa.

Envuelva la placa en papel de aluminio para minimizar el fotoblanqueo de fluorescencia y, a continuación, proceda a ejecutar la placa en el equipo de qPCR. Configure las condiciones de ciclo y la configuración de la curva de fusión como se describe en el protocolo de texto.