Name: Preparación de la aguda rodajas de hipocampo de ratas y ratones transgénicos para el estudio de las alteraciones sinápticas durante el envejecimiento y la patología amiloide (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-23T14:15:00.000+00:00
Duration: 14 min 57 s
Description: Aprende a preparar rodajas de hipocampo de ratas y ratones envejecidos para estudiar alteraciones sinápticas relacionadas con el envejecimiento cerebral y la patología amiloide. Este protocolo minimiza daños durante la disección y permite evaluar cambios en la función sináptica.

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El trabajo apoyado por el NIH subvención AG027297, un premio de la médula espinal y la confianza Kentucky Head Injury Research, y un regalo de la Fundación Kleberg.

<ol><li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase%2Fphosphatase+activities+parallel+reduced+synaptic+strength+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Alterations in the balance of protein kinase/phosphatase activities parallel reduced synaptic strength during aging.</a> J Neurophysiol. 80, 1567-1570 (1998).</li>
<li>Norris, C. M., Korol, D. L., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+and+long-term+potentiation+reversal+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Increased susceptibility to induction of long-term depression and long-term potentiation reversal during aging.</a> J Neurosci. 16, 5382-5392 (1996).</li>
<li>Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+%27zipper%27+slice+studies+reveal+a+necessary+role+for+calcineurin+in+the+increased+activity+of+L-type+Ca%282%2B%29+channels+with+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Hippocampal 'zipper' slice studies reveal a necessary role for calcineurin in the increased activity of L-type Ca(2+) channels with aging.</a> Neurobiol Aging. 31, 328-338 (2010).</li>
<li>Burke, S. N., Barnes, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+synapses+and+hippocampal+circuit+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Senescent synapses and hippocampal circuit dynamics.</a> Trends Neurosci. 33, 153-161 (2010).</li>
<li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+homeostasis+and+modulation+of+synaptic+plasticity+in+the+aged+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Calcium homeostasis and modulation of synaptic plasticity in the aged brain.</a> Aging Cell. 6, 319-325 (2007).</li>
<li>Foster, T. C., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-associated+changes+in+Ca%282%2B%29-dependent+processes%3A+relation+to+hippocampal+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Age-associated changes in Ca(2+)-dependent processes: relation to hippocampal synaptic plasticity.</a> Hippocampus. 7, 602-612 (1997).</li>
<li>Thibault, O., Gant, J. C., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+of+the+calcium+hypothesis+of+brain+aging+and+Alzheimer%27s+disease%3A+minding+the+store%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Expansion of the calcium hypothesis of brain aging and Alzheimer's disease: minding the store.</a> Aging Cell. 6, 307-317 (2007).</li>
<li>Demuro, A., Parker, I., Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+signaling+and+amyloid+toxicity+in+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Calcium signaling and amyloid toxicity in Alzheimer disease.</a> J Biol Chem. 285, 12463-12468 (2010).</li>
<li>Green, K. N., LaFerla, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+calcium+to+Abeta+and+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Linking calcium to Abeta and Alzheimer's disease.</a> Neuron. 59, 190-194 (2008).</li>
<li>Kumar, A., Thinschmidt, J. S., Foster, T. C., King, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+effects+on+the+limits+and+stability+of+long-term+synaptic+potentiation+and+depression+in+rat+hippocampal+area+CA1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Aging effects on the limits and stability of long-term synaptic potentiation and depression in rat hippocampal area CA1.</a> J Neurophysiol. 98, 594-601 (2007).</li>
<li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+age-related+alterations+in+synaptic+plasticity+by+blockade+of+L-type+Ca2%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Reversal of age-related alterations in synaptic plasticity by blockade of L-type Ca2+ channels.</a> J Neurosci. 18, 3171-3179 (1998).</li>
<li>Norris, C. M., Scheff, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+afferent+function+and+synaptic+strength+in+hippocampal+CA1+following+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Recovery of afferent function and synaptic strength in hippocampal CA1 following traumatic brain injury.</a> J Neurotrauma. 26, 2269-2278 (2009).</li>
<li>Sama, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-1beta-dependent+signaling+between+astrocytes+and+neurons+depends+critically+on+astrocytic+calcineurin%2FNFAT+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Interleukin-1beta-dependent signaling between astrocytes and neurons depends critically on astrocytic calcineurin/NFAT activity.</a> J Biol Chem. 283, 21953-21964 (2008).</li>
<li>Ye, H., Jalini, S., Mylvaganam, S., Carlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+large-conductance+Ca%282%2B%29-activated+K%28%2B%29+channels+depresses+basal+synaptic+transmission+in+the+hippocampal+CA1+area+in+APP+%28swe%2Find%29+TgCRND8+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Activation of large-conductance Ca(2+)-activated K(+) channels depresses basal synaptic transmission in the hippocampal CA1 area in APP (swe/ind) TgCRND8 mice.</a> Neurobiol Aging. 31, 591-604 (2010).</li>
<li>Bear, M. F., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity%3A+LTP+and+LTD%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity: LTP and LTD.</a> Curr Opin Neurobiol. 4, 389-399 (1994).</li>
<li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+hippocampal+synaptic+plasticity+in+age-related+memory+decline%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Involvement of hippocampal synaptic plasticity in age-related memory decline.</a> Brain Res Brain Res Rev. 30, 236-249 (1999).</li>
<li>Foster, T. C., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+is+associated+with+impaired+memory+in+aged+Fischer+344+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Susceptibility to induction of long-term depression is associated with impaired memory in aged Fischer 344 rats.</a> Neurobiol Learn Mem. 87, 522-535 (2007).</li>
<li>Hsu, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase+and+phosphatase+activities+and+age-related+impairments+of+synaptic+transmission+and+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Alterations in the balance of protein kinase and phosphatase activities and age-related impairments of synaptic transmission and long-term potentiation.</a> Hippocampus. 12, 787-802 (2002).</li>
<li>Vouimba, R. M., Foy, M. R., Foy, J. G., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((17beta-estradiol+suppresses+expression+of+long-term+depression+in+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">17beta-estradiol suppresses expression of long-term depression in aged rats.</a> Brain Res Bull. 53, 783-787 (2000).</li>
<li>Abdul, H. M., Furman, J. L., Sama, M. A., Mathis, D. M., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NFATs+and+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">NFATs and Alzheimer's Disease.</a> Mol Cell Pharmacol. 2, 7-14 (2010).</li>
<li>Abdul, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+decline+in+Alzheimer%27s+disease+is+associated+with+selective+changes+in+calcineurin%2FNFAT+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cognitive decline in Alzheimer's disease is associated with selective changes in calcineurin/NFAT signaling.</a> J Neurosci. 29, 12957-12969 (2009).</li>
<li>Anantharaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-amyloid+mediated+nitration+of+manganese+superoxide+dismutase%3A+implication+for+oxidative+stress+in+a+APPNLH%2FNLH+X+PS-1P264L%2FP264L+double+knock-in+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Beta-amyloid mediated nitration of manganese superoxide dismutase: implication for oxidative stress in a APPNLH/NLH X PS-1P264L/P264L double knock-in mouse model of Alzheimer's disease.</a> Am J Pathol. 168, 1608-1618 (2006).</li>
<li>Gengler, S., Hamilton, A., Holscher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+in+the+hippocampus+of+a+APP%2FPS1+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease+is+impaired+in+old+but+not+young+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity in the hippocampus of a APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease is impaired in old but not young mice.</a> PLoS One. 5, e9764-e9764 (2010).</li>
<li>Stringer, J. L., Lothman, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+effects+of+extracellular+calcium+concentrations+on+hippocampal+pyramidal+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">In vitro effects of extracellular calcium concentrations on hippocampal pyramidal cell responses.</a> Exp Neurol. 101, 132-146 (1988).</li>
<li>Landfield, P. W., Pitler, T. A., Applegate, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+high+Mg2%2B-to-Ca2%2B+ratios+on+frequency+potentiation+in+hippocampal+slices+of+young+and+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">The effects of high Mg2+-to-Ca2+ ratios on frequency potentiation in hippocampal slices of young and aged rats.</a> J Neurophysiol. 56, 797-811 (1986).</li>
<li>Ames, A. 3rd, Sakanoue, M., Endo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NA%2C+K%2C+CA%2C+MG%2C+AND+C1+CONCENTRATIONS+IN+CHOROID+PLEXUS+FLUID+AND+CISTERNAL+FLUID+COMPARED+WITH+PLASMA+ULTRAFILTRATE%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">NA, K, CA, MG, AND C1 CONCENTRATIONS IN CHOROID PLEXUS FLUID AND CISTERNAL FLUID COMPARED WITH PLASMA ULTRAFILTRATE.</a> J Neurophysiol. 27, 672-681 (1964).</li>
<li>Gant, J. C., Sama, M. M., Landfield, P. W., Thibault, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+simultaneous+emergence+of+multiple+hippocampal+biomarkers+of+aging+is+mediated+by+Ca2%2B-induced+Ca2%2B+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early and simultaneous emergence of multiple hippocampal biomarkers of aging is mediated by Ca2+-induced Ca2+ release.</a> J Neurosci. 26, 3482-3490 (2006).</li>
<li>Thibault, O., Hadley, R., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+postsynaptic+%5BCa2%2B%5Di+and+L-type+calcium+channel+activity+in+aged+hippocampal+neurons%3A+relationship+to+impaired+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Elevated postsynaptic [Ca2+]i and L-type calcium channel activity in aged hippocampal neurons: relationship to impaired synaptic plasticity.</a> J Neurosci. 21, 9744-9756 (2001).</li>
<li>Thibault, O., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+single+L-type+calcium+channels+in+hippocampal+neurons+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Increase in single L-type calcium channels in hippocampal neurons during aging.</a> Science. 272, 1017-1020 (1996).</li>
<li>Stutzmann, G. E., Caccamo, A., LaFerla, F. M., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysregulated+IP3+signaling+in+cortical+neurons+of+knock-in+mice+expressing+an+Alzheimer%27s-linked+mutation+in+presenilin1+results+in+exaggerated+Ca2%2B+signals+and+altered+membrane+excitability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dysregulated IP3 signaling in cortical neurons of knock-in mice expressing an Alzheimer's-linked mutation in presenilin1 results in exaggerated Ca2+ signals and altered membrane excitability.</a> J Neurosci. 24, 508-513 (2004).</li>
<li>Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+ryanodine+receptor+recruitment+contributes+to+Ca2%2B+disruptions+in+young%2C+adult%2C+and+aged+Alzheimer%27s+disease+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enhanced ryanodine receptor recruitment contributes to Ca2+ disruptions in young, adult, and aged Alzheimer's disease mice.</a> J Neurosci. 26, 5180-5189 (2006).</li>
<li>Lee, H. K., Min, S. S., Gallagher, M., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NMDA+receptor-independent+long-term+depression+correlates+with+successful+aging+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">NMDA receptor-independent long-term depression correlates with successful aging in rats.</a> Nat Neurosci. 8, 1657-1659 (2005).</li>
<li>McNaughton, B. L., Douglas, R. M., Goddard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+enhancement+in+fascia+dentata%3A+cooperativity+among+coactive+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Synaptic enhancement in fascia dentata: cooperativity among coactive afferents.</a> Brain Res. 157, 277-293 (1978).</li>
</ol>

La producción de este video-artículo fue patrocinado por Leica Microsystems.

Los pasos descritos en este protocolo ayudará a asegurar que la disección del cerebro se llevan a cabo al menos tan rápida y eficientemente en la edad, como en ratas adultas jóvenes. También proporcionan suficiente detalle para los principiantes a crear sus propios estudios de corte en la LTP y LTD. Si una mayor exploración del envejecimiento y los cambios de AD en la función sináptica y la plasticidad es una de sus metas, hay al menos otras dos cuestiones metodológicas, ha aludido más arriba, que merecen mayor consideración. Laboratorios de primera, han mostrado que el Ca 2 +: Mg2 + en relación ACSF grabación puede tener un efecto marcado en la plasticidad sináptica de inducción en rodajas de hipocampo 2,10,24,25. En el LCR de mamíferos, el Ca 2 +: Mg2 + proporción es de aproximadamente una (por ejemplo, ver 26). Sin embargo, ACSF Ca 2 +: Mg2 + ratios más cercano a 2 se utilizan comúnmente en los estudios de corte de la función sináptica y la plasticidad. En los primeros estudios, esta práctica se adaptó probablemente para optimizar la inducción de la LTP, y posteriormente se convirtió en rutina para todos los estudios de plasticidad. Sin embargo, esta práctica puede ser problemático en los estudios de envejecimiento y la EA debido a las diferencias bien caracterizado en la regulación neuronal de Ca 2 +. En concreto, Ca 2 + afluencia y / o Ca 2 + inducida por Ca 2 + de liberación se encuentra elevada en ratas de edad avanzada y / o ratones modelo AD durante la activación neuronal 3,27-31. La inducción de LTD es particularmente sensible a los cambios sutiles en los niveles de ACSF + Ca 2. El protocolo, que utiliza 2 mM Ca 2 + y 2 mM Mg 2 +, suele dar lugar a LTD para la edad, pero no animales adultos jóvenes y 2, mientras que los estudios que utilizan un Ca 2 +: Mg2 relación + más cercano a dos, se ha observado LTD sólida en los adultos en el ausencia de una diferencia de edad 2,10 o en conjunto con la reducción de LTD en ratas de 32 años. Estas observaciones ponen de relieve la necesidad de considerar cuidadosamente ACSF Ca 2 + y Mg 2 + cuando se comparan los niveles de Ca 2 +-dependiente de la plasticidad en los animales adultos mayores y jóvenes. El segundo problema metodológico se refiere a la fuerte dependencia de la LTP en la despolarización postsináptica 33 y posible envejecimiento / genotipo las diferencias en la fuerza sináptica. En un experimento típico de LTP, de base y la intensidad de la estimulación LTP se ajusta para producir una media máxima (o de tres cuartos de máxima) EPSP amplitud. El problema potencial es que las ratas y los ratones de edad por lo general muestran una reducción APP/PS1 fuerza sináptica relación con sus homólogos de tipo menor y / o silvestres, lo que significa que los valores basales EPSP también será menor en las ratas y los ratones de edad APP/PS1. PPSE pequeños se puede traducir en menos de despolarización durante la estimulación LTP, resultando en una menor probabilidad de inducir LTP 33. Debido a este potencial de confundir, es difícil determinar si estos animales presentan un déficit de rendimiento, un déficit de la plasticidad o ambas cosas. Es decir, los mecanismos de inducción de LTP en ratones de edad y / o APP/PS1 puede ser funcionalmente intacto (sin déficit de plasticidad), pero lo suficientemente estimuladas (déficit de rendimiento) en estas condiciones. Esta distinción es fundamental, como mecanismos para el rendimiento y los mecanismos de plasticidad puede responder de manera muy diferente a un determinado tratamiento farmacológico. Tratamos de minimizar el impacto de rendimiento reducido en la inducción de LTP por la normalización de la amplitud de la EPSP al mismo nivel (por ejemplo 1 mV) a través de todos los cortes antes de la estimulación LTP. Otras estrategias pueden ser eficaces también (por ejemplo el uso de la tensión o la pinza de corriente para igualar el potencial de membrana entre los grupos durante la estimulación LTP), y deben ser considerados en la investigación de LTP en estos modelos animales.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Pescador </td><td> BP358-1 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Pescador </td><td> BP366-500 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 (monobásico) </td><td> Sigma </td><td> P5379-100G </td></tr><tr><td> MgSO4 </td><td> Sigma </td><td> M2643-500G </td></tr><tr><td> CaCl2 (dihidrato) </td><td> Sigma </td><td> C3306-250G </td></tr><tr><td> NaHCO3 </td><td> Pescador </td><td> S233-500 </td></tr><tr><td> C 6 H 12 O 6 (glucosa) </td><td> Pescador </td><td> BP350-1 </td></tr></tbody></table> Reactivos Tabla 1. Requeridas <table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del equipo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Erlenmeyer Frascos </td><td> Pescador </td><td> FB-500-2000 FB-500-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Acuario pelele </td><td></td><td></td><td> Se utiliza para oxigenar los medios de comunicación. Disponible en la mayoría de las tiendas de mascotas </td></tr><tr><td> 50 ml vaso de vidrio </td><td> Pescador </td><td> 02-540g </td><td> Para storarge cerebro en ACSF </td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Pescador </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Guillotina de Pequeños Animales </td><td> World Precision Instruments (IPM) </td><td> DCAP-M </td><td></td></tr><tr><td> Una toalla de papel plana </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> # 11 pluma quirúrgica hoja </td><td> Pescador </td><td> 08 a 916-5B </td><td></td></tr><tr><td> Bibi hueso tijeras </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia (FST) </td><td> 16044-10 </td><td></td></tr><tr><td> Lempert Pinzas </td><td> Roboz </td><td> RS-8,321 </td><td> Se utiliza para las ratas </td></tr><tr><td> Friedman-Pearson Pinzas </td><td> FST </td><td> 16020-14 </td><td> El uso de ratones o ratas </td></tr><tr><td> Hipocampo herramienta </td><td> FST </td><td> 10099-15 </td><td></td></tr><tr><td> Cuchara </td><td></td><td></td><td> Una cucharilla de plástico va a hacer </td></tr><tr><td> Espátula </td><td> Pescador </td><td> 21-401-25A </td><td> Espátula </td></tr><tr><td> Quirúrgico tijeras iris </td><td> FST </td><td> 14058-09 </td><td></td></tr><tr><td> pipetas de plástico de transferencia </td><td> Pescador </td><td> 13-711-43 </td><td></td></tr><tr><td> 110 mm de papel de filtro Whatman </td><td> Pescador </td><td> 09-805E </td><td> Cat Whatman. 1001-110 </td></tr><tr><td> Vidrio una caja de petri </td><td> Pescador </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Leica VT1000P Manual vibración micrótomo </td><td> Vibratome </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 0,1 mm FA-10 Pluma S blade </td><td> Ted Pella </td><td> 121-9 </td><td> 0,1 mm FA-10 Pluma S blade </td></tr><tr><td> Pipeta Pasteur de vidrio de borosilicato (con perilla de goma) </td><td> Pescador </td><td> 13 a 678-20A </td><td> Para la transferencia de sectores: Consejo se interrumpe y el calor pulido para mayor apertura </td></tr><tr><td> 35 mm plato Cultura Polysterine </td><td> Corning </td><td> 430588 </td><td> Se utiliza para recoger trozos después de la disección </td></tr></tbody></table> Tabla 2. Herramientas y materiales para la disección <table border="1"><tbody><tr><td> Equipos / Materiales </td><td> Empresa </td><td> Comentarios (opcional) </td></tr><tr><td> Cámara de retención </td><td> Hecha a la medida </td><td></td></tr><tr><td> P-97 Extractor horizontal con una pipeta </td><td> Sutter Instrument Co. </td><td></td></tr><tr><td> Vibraciones mesa aislamiento </td><td> Técnica Manufacturing Corporation (TMC) </td><td></td></tr><tr><td> Jaula de Faraday </td><td> Hecha a la medida </td><td></td></tr><tr><td> Pyrex Aspirador Botella con brazo lateral inferior (Product # 1220-1L) </td><td> Corning </td><td></td></tr><tr><td> Gravedad controló conjunto con el regulador IV (Producto # 2C8891) </td><td> Baxter </td><td></td></tr><tr><td> Línea de aspiración central </td><td></td><td> Disponible en la mayoría de los modernos laboratorios </td></tr><tr><td> 95% O 2 / 5% CO 2 mezcla de gases </td><td> Escocést-bruto Co. </td><td></td></tr><tr><td> TygonTM Laboratorio de tubos De O 2 / CO 2 de entrega </td><td> Fisher Scientific </td><td> No es tóxico, no oxidante, viene en una variedad de tamaños. </td></tr><tr><td> Eclipse E600FN microscopio </td><td> Nikon </td><td> con los objetivos de 10x y 40x, cerca de infrarrojo de filtro, y las buenas prácticas agrarias, DS-Rojo2 filtros </td></tr><tr><td> Ajustar Cool ES la cámara digital </td><td> Fotometría </td><td> Ajustar Cool ES la cámara digital </td></tr><tr><td> X-Cite iluminador fluorescente </td><td> EXFO </td><td> X-Cite iluminador fluorescente </td></tr><tr><td> Microscopio Plataforma </td><td> Siskiyou </td><td> Costumbre montado </td></tr><tr><td> RC-22 sumergibles grabación de la cámara (Producto # 64-0228) </td><td> Warner Instruments (WI) </td><td> Requiere P-1 adaptador de la plataforma y el escenario (Producto # 64-0277 de Warner) </td></tr><tr><td> TC2BIP 2/3Ch controlador de temperatura </td><td> Microcontrols celular </td><td> TC2BIP 2/3Ch controlador de temperatura </td></tr><tr><td> 4 Manual del Eje en miniatura manipulador </td><td> Siskiyou </td><td></td></tr><tr><td> De alambre de platino iridio (0,002 in) (Artículo # PTT0203) </td><td> WPI </td><td></td></tr><tr><td> A365 estímulo aislador </td><td> WPI </td><td> A365 estímulo aislador </td></tr><tr><td> MultiClamp amplificador 700b </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Digidata 1322A convertidor A / D </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> PCLAMP software </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Ordenador personal (Pentium 4) </td><td> Dell </td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 3. Electrofisiología equipos y materiales

preparación de la aguda rodajas de hipocampo de ratas y ratones transgénicos para el estudio de las alteraciones sinápticas durante el envejecimiento y la patología amiloide

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

La preparación de roedores rebanada hipocampo es quizás la herramienta más ampliamente utilizada para la investigación de la función sináptica y la plasticidad de mamíferos. El hipocampo se pueden extraer de forma rápida y fácil de ratas y ratones y las rodajas de permanecer viables durante horas en el líquido cefalorraquídeo artificial oxigenada. Por otra parte, las técnicas básicas de electrophysisologic se aplican fácilmente a la investigación de la función sináptica en rodajas de hipocampo y han proporcionado algunos de los mejores biomarcadores para el deterioro cognitivo. El corte del hipocampo es especialmente popular para el estudio de los mecanismos de plasticidad sináptica involucrados en el aprendizaje y la memoria. Los cambios en la inducción de la potenciación a largo plazo y la depresión (LTP y LTD) de la eficacia sináptica en rodajas de hipocampo (o falta de ella) se utilizan con frecuencia para describir el fenotipo neurológico de los animales con deficiencias cognitivas y / o para evaluar el mecanismo de acción de compuestos nootrópicos. En este artículo se describen los procedimientos que utilizamos para la preparación de rodajas de hipocampo de ratas y ratones transgénicos para el estudio de las alteraciones sinápticas del cerebro asociada con el envejecimiento y la enfermedad de Alzheimer (EA) 3.1. El uso de ratas y ratones de edad AD modelo puede presentar una serie de desafíos para los investigadores acostumbrados a usar las ratas más jóvenes y / o ratones en sus investigaciones. Ratas de edad avanzada tienen más grueso y más resistente cráneos del tejido conectivo que los más jóvenes ratas y ratones, lo que puede retrasar la extracción del cerebro y / o la disección y, en consecuencia negar o exagerar las diferencias reales con la edad en la función sináptica y la plasticidad. El envejecimiento y la patología amiloide también pueden exacerbar el daño del hipocampo sostenido durante el proceso de disección, una vez más que complica cualquier inferencias extraídas de la evaluación fisiológica. En este caso, hablamos de las medidas adoptadas durante el procedimiento de disección para minimizar estos problemas. Ejemplos de las respuestas sinápticas adquiridos en &quot;saludable&quot; y &quot;poco saludables&quot; rebanadas de ratas y ratones se proporcionan, así como representante de los experimentos de plasticidad sináptica. El posible impacto de otros factores metodológicos en la función sináptica en estos modelos animales (por ejemplo, componentes de la solución de grabación, los parámetros de estimulación) también se discuten. Aunque el foco de este artículo es sobre el uso de las ratas viejas y en ratones transgénicos, los novatos para cortar la fisiología debe encontrar suficiente detalle aquí para empezar a trabajar en sus propios estudios, usando una variedad de modelos de roedores.

En este artículo se describen los procedimientos para la preparación de rodajas de hipocampo de ratas y ratones transgénicos para el estudio de las alteraciones sinápticas del cerebro asociadas con el envejecimiento y relacionadas con la edad las enfermedades neurodegenerativas, tales como la enfermedad de Alzheimer.

Preparación de la aguda rodajas de hipocampo de ratas y ratones transgénicos para el estudio de las alteraciones sinápticas durante el envejecimiento y la patología amiloide

La preparación de cortes hipocampales de roedores es, quizás, la herramienta más utilizada ampliamente para investigar la función y la plasticidad sináptica de los mamíferos. La ...

Los cortes del hipocampo de roedores se utilizan frecuentemente en el estudio de la función y plasticidad sináptica de mamíferos. Aquí demostramos un protocolo para obtener y estudiar cortes de ratas y ratones ancianos, que tienen cráneos más gruesos y tejido conectivo más resistente que las ratas y ratones jóvenes. Estas características pueden retrasar la extracción o disección del cerebro, y en consecuencia, anular o exagerar las diferencias reales relacionadas con la edad en la función y plasticidad sináptica.Además, el envejecimiento y la patología amiloide pueden agravar el daño hippocampal sufrido durante el procedimiento de disección, complicando aún más las inferencias obtenidas a partir de la evaluación fisiológica. En esta demostración, se describen los pasos realizados durante los procedimientos de extracción y disección para minimizar estos problemas. Primero, el cerebro se extrae rápidamente y se coloca en una solución salina artificial cerebral fría, con bajo contenido de calcio y hielo.A continuación, los hipocampos se extraen suavemente sobre una plataforma de disección fría con hielo, y se preparan cortes del hipocampo utilizando un vibrátomo e incubarlos en un LCR oxigenado que contiene calcio. Finalmente, se evocan potenciales y corrientes sinápticas en múltiples subregiones del hipocampo y se registran; los resultados obtenidos demuestran los efectos del envejecimiento y/o de una patología similar a la enfermedad de Alzheimer sobre la función y plasticidad sináptica. El uso adecuado de esta técnica tiene implicaciones para el deterioro cognitivo relacionado con la edad y la demencia debida a la enfermedad de Alzheimer.Esto se debe a que la disfunción sináptica es uno de los biomarcadores más tempranos de estos síntomas clínicos, demostrando este procedimiento. Hoy será el Dr. Chris Norris, el investigador principal del laboratorio, junto a un fregadero grande. Prepare el área de disección para la extracción del cerebro y la disección del hipocampo.Incluya una toalla de papel doblada, una hoja de bisturí número 11, tijeras BB, fórceps para hueso y una herramienta para hipocampo, una espátula dual especializada de instrumentos quirúrgicos finos. También coloque tijeras quirúrgicas pequeñas, una espátula delgada, una pipeta de plástico, papel de filtro Whatman, una placa de Petri de vidrio de 100 milímetros llena de hielo, una cuchara de plástico y un vaso con solución libre de calcio parcialmente descongelada. Un LCR cubierto con parafina.Tras la decapitación de la rata, el cerebro debe extraerse lo más rápidamente posible. Coloque la cabeza sobre la toalla de papel y, con el bisturí, realice rápidamente una incisión en la línea media del cuero cabelludo, desde el hueso nasal hasta el hueso occipital.Asegúrese de cortar completamente el músculo cutáneo, exponiendo por completo las suturas del cráneo. Sujete firmemente la cabeza y corte a través de las placas occipital, parietal y frontal siguiendo la sutura media. Asegúrese de mantener las cizallas inferiores firmemente contra la superficie interna del cráneo y alejadas del cerebro.Esto es fundamental para evitar rayaduras accidentales. Siguiente diapositiva. Coloque las pinzas de Ron bajo la placa parietal izquierda y cierre las mandíbulas, moviendo hacia arriba y hacia adelante para separar las placas parietal y occipital.Si es necesario, utilice los fórceps de Ron para retirar también la placa frontal izquierda. Repita el procedimiento para el otro hemisferio. Una vez desplazadas las placas, use fórceps de Ron o tijeras para retirar suavemente o cortar cualquier duramadre que pueda estar adherida a las placas temporales y extendida sobre la superficie del cerebro.Ahora deslice los fórceps de Ron entre el cerebro y la placa temporal derecha, manteniendo la presión hacia el cráneo y lejos del cerebro. Presione y gire la placa temporal hacia afuera hasta escuchar o sentir un crujido. Repita el procedimiento en el lado izquierdo.Deslice la espátula ancha por delante de la herramienta para hipocampo entre la superficie ventral del cerebro y las placas óseas inferiores del cráneo hasta que quede completamente debajo del cerebro. Muévala lateralmente de un lado a otro y hacia delante y hacia atrás varias veces para seccionar los nervios craneales intactos utilizando la herramienta para hipocampo. Extraiga el cerebro y sumérjalo en una solución de A CSF libre de calcio cubierta con Parfum y déjelo enfriar durante aproximadamente un minuto.Para extraer los hipocampos, utilice una cucharilla para retirar el cerebro del LCR y colóquelo sobre un papel Watman humedecido con LCR, colocado sobre la tapa de una placa de Petri fría con hielo. Con la hoja del escalpelo, retire el cerebelo y aproximadamente un cuarto de los lóbulos frontales rostrales. A continuación, corte a través de la fisura interhemisférica para separar completamente los dos hemisferios.Coloque un hemisferio nuevamente en la mezcla de LCR y coloque el otro sobre la plataforma de disección de manera que el plano coronal del lóbulo frontal quede orientado hacia abajo; el tallo cerebral blanco y el mesencéfalo deben distinguirse fácilmente de la corteza sobreyacente de color rosa o grisáceo. Localice los colículos en el mesencéfalo. Estos tendrán el aspecto de dos protuberancias blancas y se encontrarán en la parte superior del cerebro.En esta orientación, sostenga suavemente el mesencéfalo en su lugar con tijeras y deslice la espátula entre los cuerpos callosos y la corteza. Luego, tire suavemente del bulbo raquídeo, el mesencéfalo y el tálamo. Puede ser necesario cortar con tijeras el tejido conectivo o la vasculatura.Utilice el borde afilado de la espátula para seccionar el fórnix, un haz de fibras blancas ubicado en la porción dorsal anterior del hipocampo. Con las tijeras, continúe suavemente separando el bulbo raquídeo, el mesencéfalo y el tálamo sin seccionarlos completamente del resto del cerebro.La fibra blanca de fibras que forma una hipérbola superficial en la parte inferior del hipocampo debería ser ahora visible en esta orientación. Utilizando la pipeta de transferencia, rocíe suavemente algo de LCR en el espacio debajo de la AIA para ayudar a separar el hipocampo de la corteza. Deslice suavemente la espátula en este espacio y, mientras sostiene firmemente el bulbo raquídeo, el mesencéfalo y el tálamo con las tijeras, gire suavemente el hipocampo y corte con cuidado cualquier resto de corteza, vasos sanguíneos y materia blanca que permanezcan adheridos al hipocampo.Enjuague con unos pocos mililitros de LCR A. Utilizando la pipeta de transferencia, mantenga el tejido húmedo y frío con una mezcla pastosa de LCR. A continuación, retire el otro hemisferio y repita la disección para seccionar los hipocampos de rata.Llene el depósito del vibrátomo con ACSF frío con hielo y libre de calcio, de manera que la plataforma de corte y la hoja queden completamente sumergidas. Utilice un escalpelo para cortar las puntas rostral y caudal de cada hipocampo y colóquelas juntas sobre sus superficies rostrales, con el giro dentado de cada hipocampo enfrentado al del otro. Pegue el tejido cerebral sobre un bloque de sujeción y transfiéralo a la plataforma de corte del vibrátomo.Para experimentos de fisiología sináptica, se recomiendan secciones de 400 micrómetros. Utilizando una pipeta de transferencia de boca ancha, transfiera las secciones a una pequeña placa de Petri que contenga CSF sin calcio y frío con hielo.Una vez completado el corte, las secciones se transfieren a la cámara de almacenamiento, rellena con A CSF que contiene calcio y está oxigenada. Eleve gradualmente la temperatura de la cámara de 27 a 32 grados Celsius para realizar grabaciones extracelulares básicas. En secciones agudas, la cámara de registro se coloca sobre la platina del microscopio, de modo que el A CSF precalentado se administra por gravedad a través de un regulador de flujo y se elimina mediante una línea central de vacío.Utilizando un pincel pequeño, transfiera una sección a la cámara de registro de manera que quede sumergida en CSF-A y apoyada sobre la malla insertada. Deje que la sección se aclimate durante 10 a 15 minutos. Mientras la sección se está aclimatando, encienda el estimulador o aislador de estímulo y reduzca la salida a cero.Luego, coloque un electrodo estimulante sobre el corte en la región del estrato radiatum del CA2 cerca del límite del CA3. Introduzca el electrodo de registro en el estrato radiatum del CA1, rompiendo ligeramente la superficie del corte. Aumente la salida del estimulador a un nivel moderado aquí.El aislador de estímulo se ajusta a unos 150 microamperios. Baje lentamente el electrodo de estimulación en pequeños intervalos hasta registrar un artefacto de estímulo. En CA uno, siga bajando lentamente tanto el electrodo de estimulación como el de registro en intervalos mientras adquiere las respuestas de CA uno.Establezca una curva de fuerza sináptica hasta que las amplitudes del volley de fibra y del potencial postsináptico excitatorio alcancen niveles máximos utilizando un programa de adquisición de software como Clampex. Luego, use el software para aplicar estímulos en un rango de intensidades y registre la actividad correspondiente en el CA1. El rango y el número de niveles de intensidad del estímulo utilizados deben ser suficientes para generar una curva sigmoidea cuando se grafiquen frente a los valores de FV o EPSP.A continuación, para investigar la plasticidad sináptica, restablezca la intensidad del estímulo para cada corte de modo que se elice una respuesta de un milivoltio. Inicie la estimulación basal a una frecuencia de 0,033 hercios del potencial postsináptico excitador (EPSP). Los valores de la pendiente deben mantenerse estables durante al menos 20 minutos antes de la inducción de la potenciación a largo plazo (LTP) o la depresión a largo plazo (LTD).Para registrar un período de línea base, utilice un archivo de parámetros de clamp X para estimular y registrar cada 30 segundos. A continuación, para inducir la PTL, abra un archivo de parámetros independiente para inducir la PTL mediante un tren de un segundo de estimulación a 100 hertz o múltiples ráfagas cortas de estimulación a 200 hertz aplicadas cada 200 milisegundos para la inducción de la DLT. Aplique 900 pulsos de estimulación a una frecuencia de un hertz.Después de que los trenes de estímulos regresen al archivo de parámetros de línea base, registre las respuestas sinápticas durante 60 minutos o más. Compare los valores de la pendiente del PEPS obtenidos antes y 60 minutos después de la estimulación de alta o baja frecuencia para determinar la presencia de potenciación a largo plazo (LTP), indicada por un aumento en la fuerza sináptica, o de depresión a largo plazo (LTD), indicada por una disminución en la fuerza sináptica. Se cree ampliamente que ambos procesos reflejan mecanismos críticos para el aprendizaje y la memoria.Aquí se muestran curvas representativas de la fuerza sináptica de dos cortes hipocampales diferentes provenientes de dos ratones A PP PS.One. Un ratón fue tratado con un nuevo reactivo viral asociado a adenovirus antiinflamatorio. El otro fue tratado con un reactivo viral control.Como puede observarse cuando se activa un número similar de fibras presinápticas entre las condiciones experimentales. Cuando los grupos muestran amplitudes de FV similares, como se indica en el eje x, la curva del corte tratado con el reactivo a se desplaza hacia la izquierda, lo que indica mayores amplitudes de EPSP. Estos datos demuestran que la intensidad sináptica basal es mayor en el corte tratado con el reactivo a.Aquí se muestran los resultados de experimentos de PTL realizados en los mismos cortes. Obsérvese que los valores de la pendiente del PEPS en el corte con el reactivo a son mucho mayores en comparación con el corte control durante la línea base de una hora posterior a la administración de la estimulación de 100 hertz, lo que indica que la PTL estuvo presente en el corte con el reactivo a, pero no en el corte control. Esta figura muestra cómo se veían las formas de onda del PEPS en cortes de ratón con reactivo A y control antes y 60 minutos después de la administración de la estimulación de 100 hertz.El aumento en la pendiente del PEPS en el período posterior a los 100 hercios es muy evidente en el corte con el reactivo A, indicativo de la PTL conjuntamente. Los experimentos en las figuras mostradas hasta ahora indican que el reactivo A incrementa la fuerza sináptica y mejora los déficits de la PTL. En ratones PP PS uno, se realizaron experimentos similares en LACS hipocampales de ratas ancianas.Aquí se muestran las curvas de fuerza sináptica de dos secciones hipocampales diferentes de una rata tratada con un fármaco antiinflamatorio novedoso y otra rata tratada con un reactivo control vehículo. Obsérvese que estas curvas son muy similares para las dos secciones, lo que indica que el fármaco A tiene poco efecto sobre la fuerza sináptica basal. Esta figura muestra los resultados de experimentos de DTL realizados en las mismas secciones.Téngase en cuenta que, típicamente en ratas adultas, los valores de la pendiente del PEPS en el corte tratado con vehículo están deprimidos durante la línea base de una hora tras la aplicación de una estimulación de un hercio. Sin embargo, los valores de la pendiente del PEPS en el corte tratado con el fármaco A muestran poca o ninguna depresión, lo que indica la ausencia de DTL. Aquí se muestran las formas de onda del PEPS en cortes de ratas tratadas con el fármaco A y con vehículo, antes y 60 minutos después de la aplicación de la estimulación de un hercio. La disminución de la pendiente del PEPS en el período posterior a la estimulación de un hercio es muy evidente en el corte con vehículo, pero no en el corte con el fármaco A.Los resultados en estas figuras muestran que el fármaco a mejora las diferencias de plasticidad en ratas ancianas al bloquear la inducción de la DLT, pero no afecta la función sináptica basal. Estos datos indican que múltiples parámetros de la función sináptica y la plasticidad en ratas ancianas y ratones modelo de Alzheimer pueden modularse mediante tratamientos experimentales y destacan la utilidad de los cortes hipocampales agudos para investigar el potencial nootrópico y/o neuroprotector de nuevos fármacos y reactivos experimentales. Al intentar este procedimiento, es importante recordar equilibrar la rapidez al extraer el cerebro con la precisión y suavidad al diseccionar, cortar y manipular el hipocampo para medidas electrofisiológicas.

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Investigación

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Neurociencia

Una de las características de la enfermedad de Alzheimer es la elevación de...

Preparación de oligómeros β-amiloide 1-42 Y la inducción del deterioro de plasticidad sináptica en rodajas de hipocampo

Fuente: McLeod, F., et al. Evaluación de la densidad de sinapsis en cortes de cerebro de roedores hipocampales. J. Vis. Exp. (2017). Este video muestra un método para visualizar marcadores sinápticos en cortes de cerebro del hipocampo utilizando el análisis de inmunofluorescencia confocal. Los cortes se inmunotiñen con anticuerpos primarios dirigidos a marcadores presinápticos y postsinápticos, seguidos de anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos. A continuación, los marcadores...

Análisis microscópico de sinapsis en cortes de hipocampo de ratón mediante inmunofluorescencia

En este trabajo se presenta una metodología completa para preparar y...

Mejora de la preparación y conservación de las rebanadas de hipocampo de un ratón de grabación muy estable y reproducible de la potenciación a largo plazo

Este artículo de video describe procedimientos experimentales para estudiar la plasticidad a largo plazo y sus procesos asociativos, como el marcaje sináptico, la captura y el etiquetado cruzado en las neuronas piramidales CA1 utilizando cortes agudos del hipocampo de roedores.

Investigación de sináptica Tagging / Captura y Cruz de captura utilizando aguda hipocampo rebanadas de Roedores

Este protocolo muestra la implementación de un optimizado N-metil-D-glucamine (NMDG) método de protección recuperación de preparación de corte de cerebro. Una formulación de medios de comunicación solo se utiliza para obtener confiablemente rebanadas de cerebro sano de animales de cualquier edad y para diversas aplicaciones experimentales.

Preparación de rebanadas cerebrales agudas mediante un optimizado N-metil-D-glucamine recuperación protección método

Este protocolo describe la estabilización del nivel de oxígeno en un pequeño volumen de tampón reciclado y aspectos metodológicos de la plasticidad sináptica dependiente de actividad de la grabación en rebanadas hippocampal agudas sumergidas.

Grabación de la plasticidad sináptica en rebanadas Hippocampal agudas mantenidas en un pequeño volumen reciclado - perfusión- y sistema de cámara de tipo inmersión

Un protocolo para identificar con precisión y analizar sinapsis en rebanadas hippocampal mediante inmunofluorescencia se describe en este artículo.

Evaluación de la densidad de sinapsis en rebanadas de hipocampo cerebral de roedor

Este es un protocolo para la preparación aguda de la rebanada de hipocampo adulto y envejecido del ratón que aprovecha la perfusión transcardial y el corte de rodajas con NMDG-aCSF helado para reducir el daño hipoxico al tejido. Las rebanadas resultantes se mantienen saludables durante muchas horas y son adecuadas para grabaciones de parches y de campo a largo plazo.

Minimizar la hipoxia en las rebanadas de hipocampo de ratones adultos y envejecidos

Este artículo tiene como objetivo describir un protocolo sistemático para obtener rebanadas cerebrales hipocampales horizontales en ratones. El objetivo de esta metodología es preservar la integridad de las vías de fibra del hipocampo, como la trayectoria perforante y el tracto de fibra musgo para evaluar los procesos neurológicos relacionados con el giro desánido.

Rebanadas hipocampales horizontales del cerebro del ratón

Presentamos un protocolo para preparar rodajas agudas del hipocampo dorsal-intermedio de ratones. Comparamos esta preparación transversal con el corte coronal en términos de calidad de las grabaciones y preservación de las características morfológicas de las neuronas grabadas.

Preparación de rodajas agudas del hipocampo dorsal para la grabación de células enteras y la reconstrucción neuronal en el dentate gyrus de ratones adultos

Aprende a preparar rodajas de hipocampo de ratas y ratones envejecidos para estudiar alteraciones sinápticas relacionadas con el envejecimiento cerebral y la patología amiloide. Este protocolo minimiza daños durante la disección y permite evaluar cambios en la función sináptica.

Preparación de la aguda rodajas de hipocampo de ratas y ratones transgénicos para el estudio de las alteraciones sinápticas durante el envejecimiento y la patología amiloide (Video) | JoVE Journal

Preparación de la aguda rodajas de hipocampo de ratas y ratones transgénicos para el estudio de las alteraciones sinápticas durante el envejecimiento y la patología amiloide

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