Cuantificación del alginato bacteriano mediante el ensayo de carbazol con ácido urónico

Tome un cultivo de la bacteria Pseudomonas aeruginosa en caldo.

Coloque el cultivo en un agar de aislamiento e incube para promover el crecimiento bacteriano y la producción de alginato, un exopolisacárido compuesto de ácidos urónicos.

Agregue solución salina isotónica al césped bacteriano y raspe para recolectar las células bacterianas junto con el alginato.

Transfiera la suspensión a un tubo, vórtice para dispersar el contenido y colóquelo sobre hielo para evitar la degradación enzimática.

Mida la densidad óptica, o OD, para determinar la densidad bacteriana.

Agregue la suspensión bacteriana a la solución de borato ácido y mezcle para hidrolizar el alginato en monómeros de ácido urónico.

Agregue carbazol, un reactivo cromogénico, e incube. En condiciones ácidas, el reactivo reacciona con los ácidos urónicos para formar complejos coloreados.

Mida la absorbancia para cuantificar los niveles de ácido urónico, que reflejan la concentración de alginato.

Usando una curva estándar, determine la concentración de alginato, luego divídala por la densidad celular bacteriana medida para calcular la producción de alginato por unidad de biomasa.

Para comenzar el ensayo de carbazol con ácido urónico, id