Cuantificación del alginato bacteriano mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas basado en anticuerpos

Tome una microplaca con una muestra que contenga alginato, un exopolisacárido protector producido por la bacteria Pseudomonas aeruginosa.

Prepare una dilución en serie de un patrón derivado del alginato para cuantificar la concentración de alginato de la muestra.

Agregue un tampón de recubrimiento e incube para facilitar la adherencia de las moléculas a la superficie del pozo.

Lavar para eliminar las moléculas no unidas.

Incubar con un agente bloqueador para enmascarar sitios de unión no específicos.

Lavar, luego incubar con anticuerpos primarios específicos para el alginato.

Lavar nuevamente, luego incubar con anticuerpos secundarios conjugados con enzimas que se dirigen a los anticuerpos primarios.

Lavar y luego incubar con un sustrato cromogénico, que la enzima oxida para producir un producto coloreado.

Agregue una solución ácida que detenga la reacción y mejore el color para permitir la detección colorimétrica.

Con un lector de microplacas, mida la intensidad del color.

Cree una curva estándar a partir de las intensidades de las diluciones estándar y grafique la intensidad de la muestra para determinar la concentración de alginato.

Con una micropipeta, agregue 50 microlitros de la muestra