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Microbiología
0 vistas • 2:29 min • January 30th, 2026
Tomemos un embrión de pez cebra infectado con Mycobacterium abscessus, una bacteria patógena que ataca el sistema nervioso central y forma abscesos que contienen bacterias y células inmunitarias del huésped.
Incubar el embrión sobre hielo para inmovilizarlo y luego exponerlo a una sobredosis de anestesia para detener la actividad cardíaca y neural, lo que puede provocar la muerte.
Lava el embrión para eliminar el anestésico residual.
Añade una solución detergente para alterar las membranas celulares y lisar el embrión.
Cizalla el lisado a través de una aguja para homogeneizar el tejido y liberar las bacterias.
Centrifuga, descarta el sobrenadante y vuelve a suspender el pellet en una solución de tensioactivo para evitar la formación bacteriana.
Diluye en serie la suspensión bacteriana y extiéndela sobre placas de agar.
El medio se complementa con antibióticos para inhibir el crecimiento de otros microbios mientras proliferan las células de Mycobacterium diseñadas para resistencia a los antibióticos.
Incubar para promover la formación de colonias, permitiendo cuantificar la carga bacteriana del embrión.
Para enumerar unidades formadoras de colonias o UFC en el momento deseado, se recogen cinco embriones por condición de infección y se transfiere cada embrión a un tubo microcentrífuga de 1,5 mililitros. Crioanestesiar los embriones incubándolos sobre hielo durante 10 minutos. Después de eutanasiar a los embriones con 300 a 500 miligramos por litro de tricaína, se utiliza agua estéril para lavar los embriones dos veces en un tubo nuevo.
A continuación, tras extraer agua al 2% Triton X-100 en 1 X PBS a cada embrión, se utiliza una aguja calibre 26 para homogeneizar el tejido y lograr la lisis completa.
Después de centrifugar la suspensión, usa 1 PBST para volver a suspender el perdigón. Luego, dilución en serie de placas de los homogeneados en elADC Middlebrook 7H10O complementada con BBL MGIT PANTA.
Incuba las placas a 30 grados Celsius durante 4 días antes de contar las colonias.