Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:45 min. • March 31st, 2026
Toma C. gusanos elegans cultivados en placas de agar ricas en nutrientes que contienen E. coli para la condición de control y Pseudomonas aeruginosa para la condición patógena.
Durante la incubación, los gusanos se alimentan de bacterias que colonizan la luz intestinal.
En el control, el epitelio intestinal permanece intacto, mientras que las toxinas liberadas por patógenos causan daño epitelial.
Lava los gusanos con un tampón y transfróntelos a placas complementadas con trazadores fluorescentes y bacterias inactivadas por el calor como fuente de alimento.
En el control, los trazadores fluorescentes ingeridos permanecen en el intestino, mientras que en los gusanos infectados por patógenos cruzan el epitelio dañado y entran en la cavidad corporal.
Lava los gusanos de nuevo y colócalos en platos nuevos. Luego transfiere a una placa de ensayo multipozo que contiene un fijador para preservar la estructura celular.
Quita el fijador. Luego añade un soporte para la imagen.
Observa usando un sistema de imagen de fluorescencia.
Aumento de la fluorescencia en la cavidad corporal de P. Los gusanos expuestos a aeruginosa indican permeabilidad intestinal inducida por el patógeno.
Lava las larvas L4 sincronizadas con la edad con S-buffer y transfiere aproximadamente 500 gusanos a las placas NGM que contienen diferentes bacterias y productos químicos. Luego, incuba las placas a 20 grados Celsius durante 48 horas.
Prepara las placas suplementadas con FITC con dextran mezclando 2 mililitros de E inactivado por calor. coli con cuatro miligramos de FITC-dextran. Añade 100 microlitros de la mezcla a cada una de las 20 placas de agar NGM frescas y deja que las placas se sequen durante 1 hora sobre una mesa de laboratorio limpia. Tras 48 horas de tratamiento, lava los gusanos con S-buffer, transfiere a placas con suplemento con FITC-dextrano y a placas NGM sin FITC-dextran, e incuba las placas durante la noche.
Al día siguiente, lava las lombrices con S-buffer y déjalas reposar en la placa de agar NGM fresca durante 1 hora. Añade 50 microlitros de formaldehído al 4% a cada pozo de una placa negra de 96 pozos y fondo plano, y transfiere aproximadamente 50 gusanos a cada pozo. Después de 1 o 2 minutos, retira todo el formaldehído y añade 100 microlitros de medio de montaje en cada pozo.