JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiología
0 vistas • 2:18 min • August 31st, 2026
Tome una cultivo de ameba infectada con un virus gigante conocido como Faustovirus.
Recolecte el sobrenadante de la cultura que contiene el Faustovirus.
En una rejilla de microscopía electrónica sometida a descarga eléctrica, depositar el sobrenadante.
Incube para permitir la adsorción de las partículas virales sobre la rejilla.
Seque el portaobjetos sobre papel de filtro para eliminar partículas virales no unidas.
Deposite una gota de molibdato de amonio.
El molibdato de amonio actúa como tinción negativa al unirse a la rejilla alrededor del virus y oscurecer el fondo para mejorar el contraste durante la obtención de imágenes.
Elimine el molibdato de amonio en exceso presionando la rejilla sobre papel de filtro.
Coloque la rejilla en una placa de Petri y déjela secar.
Luego, coloque la rejilla en el portamuestras.
Introduzca el portaobjeto en el microscopio electrónico.
Capture una imagen del Faustovirus y mida el tamaño del Faustovirus para análisis posteriores.
Para realizar microscopía electrónica, coloque cinco microlitros de la muestra positiva sobre una rejilla tratada con descarga de gas, e incube a temperatura ambiente durante aproximadamente 20 minutos. Seque cuidadosamente la rejilla, luego agregue una pequeña cantidad de molibdato de amonio al 1% e incube durante 10 segundos. Después de retirar cuidadosamente la gota, deje secar la rejilla durante cinco minutos. A continuación, configure el microscopio electrónico a 200 kiloelectrón voltios. Luego, coloque la rejilla sobre el portaobjetos e introduzca el portaobjetos en el microscopio. Haga clic en el icono de vista general del vacío y verifique el vacío. A continuación, cierre las válvulas y establezca un tamaño de punto cinco y un aumento de 25.000 antes de comenzar la observación. Tras localizar un virus gigante en la pantalla de adquisición, utilice la herramienta de medición para medir el virus.
Realice biología molecular y secuenciación del genoma viral de acuerdo con el protocolo descrito.