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Microbiología
0 vistas • 3:17 min • August 31st, 2026
Tome una cultivo nocturno de una bacteria lisogénica, en el que la mayoría de las células albergan ADN fágico inactivo integrado dentro de su genoma.
Inóquelo en medio fresco e incube.
Algunas bacterias experimentan inducción espontánea, entrando en el ciclo lítico, donde el ADN del fago es excindido, replicado y se producen proteínas virales.
Los fagos infecciosos recién ensamblados se liberan mediante la lisis celular.
Recolecte muestras de cultivo a intervalos definidos.
Para contar lisógenos viables no inducidos, aplique diluciones seriadas de cada muestra sobre una placa de agar e incube.
Contar colonias para calcular unidades formadoras de colonias (UFC).
Para contar fagos infecciosos, aplique las mismas diluciones sobre una placa de agar con antibiótico previamente sembrada con células huésped indicadoras resistentes al antibiótico. Dado que los lisógenos son sensibles al antibiótico, solo los huéspedes resistentes pueden crecer.
Los fagos infectan y lisan células, formando placas claras.
Cuente las placas para calcular las unidades formadoras de placas (PFUs). Un menor número de PFUs indica menos eventos de inducción espontánea.
Represente gráficamente las UFC y las UPF en función del tiempo. Durante la fase exponencial temprana del crecimiento bacteriano, las UPF son mínimas en relación con las UFC, lo que indica una inducción espontánea de fagos mínima.
Para comenzar, prepare cultivos frescos de lisógeno y de huésped indicador inocularando los cultivos nocturnos en 100 mL de LB en una proporción de 1:100. Incube a 37 °C con agitación a 180 rpm.
Para monitorear el crecimiento del lisógeno, recolecte una muestra de un mililitro cada hora a partir del momento de la inoculación durante ocho horas. Diluya seriamente el cultivo añadiendo 100 microlitros en 900 microlitros del medio LB. Vortexee a velocidad máxima y continúe la serie de diluciones desde 10⁻¹ hasta 10⁻⁹.
Coloque 10 µL de la dilución requerida sobre una placa de agar LB. Deje secar e incube a 30 °C durante 18 a 24 horas. Después de la incubación, cuente el número de colonias y calcule el número de células bacterianas viables utilizando la fórmula proporcionada.
A continuación, para enumerar las partículas de fagos infecciosos en la muestra temporal, añada 100 microlitros de células huésped indicadoras resistentes a la rifampicina en fase logarítmica al agar superior fundido, junto con rifampicina. Aplique 10 microlitros de la cultura del lisógeno diluida seriamente sobre la capa de agar superior inoculada. Deje secar y luego incube a 37 grados Celsius durante 18 a 24 horas.
Después de la incubación, cuente el número de placas y calcule las partículas de fago infecciosas utilizando la fórmula proporcionada.