Name: Un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la Cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 37 s
Description: Aprenda a encapsular folículos ováricos en una red tridimensional de fibrina-alginato para cultivo in vitro. Este método mantiene la arquitectura folicular y la comunicación celular durante la maduración del oocito.

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Este trabajo fue financiado por el NIH (U54HD41857 y PL1EB008542, un procesador Core P30 Biomateriales en el Consorcio Oncofertility conceder Hoja de Ruta).

<ol><li>Cortvrindt, R., Smitz, J., VanSteirteghem, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vitro+maturation%2C+fertilization+and+embryo+development+of+immature+oocytes+from+early+preantral+follicles+from+prepuberal+mice+in+a+simplified+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">In-vitro maturation, fertilization and embryo development of immature oocytes from early preantral follicles from prepuberal mice in a simplified culture system.</a> Human Reproduction. 11, 2656-2666 (1996).</li>
<li>Smitz, J., Cortvrindt, R., Hu, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+growth+factor+combined+with+recombinant+human+chorionic+gonadotrophin+improves+meiotic+progression+in+mouse+follicle-enclosed+oocyte+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Epidermal growth factor combined with recombinant human chorionic gonadotrophin improves meiotic progression in mouse follicle-enclosed oocyte culture.</a> Human Reproduction. 13, 664-669 (1998).</li>
<li>Xu, M., Banc, A., Woodruff, T. K., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+Follicle+Growth+and+Oocyte+Maturation+by+Culture+in+Alginate+Hydrogel+Following+Cryopreservation+of+the+Ovary+or+Individual+Follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Secondary Follicle Growth and Oocyte Maturation by Culture in Alginate Hydrogel Following Cryopreservation of the Ovary or Individual Follicles.</a> Biotechnology and Bioengineering. 103, 378-386 (2009).</li>
<li>Smitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+achievements+and+future+research+directions+in+ovarian+tissue+culture%2C+in+vitro+follicle+development+and+transplantation%3A+implications+for+fertility+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Update%22%5BJournal%5D)">Current achievements and future research directions in ovarian tissue culture, in vitro follicle development and transplantation: implications for fertility preservation.</a> Human Reproduction Update. 16, 395-414 (2010).</li>
<li>Shikanov, A., Xu, M., Woodruff, T. K., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpenetrating+fibrin-alginate+matrices+for+in+vitro+ovarian+follicle+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Interpenetrating fibrin-alginate matrices for in vitro ovarian follicle development.</a> Biomaterials. 30, 5476-5485 (2009).</li>
<li>West, E. R., Xu, M., Woodruff, T. K., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+properties+of+alginate+hydrogels+and+their+effects+on+in+vitro+follicle+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Physical properties of alginate hydrogels and their effects on in vitro follicle development.</a> Biomaterials. 28, 4439-4448 (2007).</li>
<li>Kreeger, P. K., Fernandes, N. N., Woodruff, T. K., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+mouse+follicle+development+by+follicle-stimulating+hormone+in+a+three-dimensional+in+vitro+culture+system+is+dependent+on+follicle+stage+and+dose%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Regulation of mouse follicle development by follicle-stimulating hormone in a three-dimensional in vitro culture system is dependent on follicle stage and dose.</a> Biology of Reproduction. 73, 942-950 (2005).</li>
<li>Pangas, S. A., Saudye, H., Shea, L. D., Woodruff, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approach+for+the+three-dimensional+culture+of+granulosa+cell-oocyte+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Novel approach for the three-dimensional culture of granulosa cell-oocyte complexes.</a> Tissue Engineering. 9, 1013-1021 (2003).</li>
<li>Xu, M., West, E., Shea, L. D., Woodruff, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+stage-specific+permissive+in+vitro+culture+environment+for+follicle+growth+and+oocyte+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Identification of a stage-specific permissive in vitro culture environment for follicle growth and oocyte development.</a> Biology of Reproduction. 75, 916-923 (2006).</li>
<li>Xu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulated+Three-Dimensional+Culture+Supports+Development+of+Nonhuman+Primate+Secondary+Follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Encapsulated Three-Dimensional Culture Supports Development of Nonhuman Primate Secondary Follicles.</a> Biology of Reproduction. 81, 587-594 (2009).</li>
<li>West, E. R., Shea, L. D., Woodruff, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+the+follicle+micro+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Reproductive+Medicine%22%5BJournal%5D)">Engineering the follicle micro environment.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 25, 287-299 (2007).</li>
<li>Xu, M., Kreeger, P. K., Shea, L. D., Woodruff, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+follicles+produce+live%2C+fertile+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered follicles produce live, fertile offspring.</a> Tissue Engineering. 12, 2739-2746 (2006).</li>
<li>Ebisch, I. M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+the+role+of+the+plasminogen+activator+system+and+vascular+endothelial+growth+factor+in+subfertility%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Review of the role of the plasminogen activator system and vascular endothelial growth factor in subfertility.</a> Fertility and Sterility. 90, 2340-2350 (2008).</li>
</ol>

El folículo ovárico presenta un método de encapsulación en FA-IPN permite cultivo de folículos en un entorno 3D in vitro. A FA-IPN es un proceso dinámico, de células sensibles a la matriz en la que las propiedades mecánicas iniciales están determinadas por la combinación de ambos fibrina y alginato. Durante el cultivo, el folículo encapsulado activa proteasas que degradan el único componente de la IPN, la fibrina, que se traduce en una rigidez gel disminuyendo gradualmente que es aportado exclusivamente por el ...

<table><tbody><tr><td>Fetuína</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F3385</td><td></td></tr><tr><td>SFB</td><td>Invitrogen</td><td>10082-139</td><td></td></tr><tr><td>Aprotinina</td><td>Roche Group</td><td>10236624001</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd.</td><td>039-00475</td><td>40 mM</td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A412</td><td></td></tr><tr><td>rFSH</td><td>Instituto Nacional de la Diabetes y las Enfermedades Digestivas y Renales</td><td></td><td></td></tr><tr><td>hCG</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CG-5</td><td></td></tr><tr><td>Hialuronidasa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1603</td><td></td></tr><tr><td>ITS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I1884-1VL</td><td></td></tr><tr><td>L-15</td><td>GIBCO, por Life Technologies</td><td>11415</td><td></td></tr><tr><td>&amp;alpha;MEM+Gluta MAX</td><td>GIBCO, por Life Technologies</td><td>32561</td><td></td></tr><tr><td>Pen-Estrepto</td><td>Cellgro</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>TBS</td><td>Pierce, Thermo Scientific</td><td>28379</td><td></td></tr><tr><td>Kit de fibrina Tisseel</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td>921030</td><td></td></tr><tr><td>Alginato de sodio</td><td>FMC BioPolymers</td><td>LF200DL</td><td>Mw 418kDa</td></tr></tbody></table>

un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema

A Method for Ovarian Follicle Encapsulation and Culture in a Proteolytically Degradable 3 Dimensional System

El folículo ovárico es la unidad funcional del ovario que segrega las hormonas sexuales y apoya la maduración de ovocitos. En las técnicas in vitro de folículos proporcionar una herramienta para el desarrollo del folículo modelo para investigar la biología básica, y además se está desarrollando como una técnica para preservar la fertilidad en el clínica 1-4. Nuestro sistema de cultivo in vitro cuenta con hidrogeles con el fin de imitar el ambiente de ovario nativos mediante el mantenimiento de la arquitectura folicular en 3D, interacciones célula-célula y la señalización paracrina que el desarrollo del folículo directa 5. Anteriormente, los folículos se cultivaron con éxito en alginato, un derivado de algas inertes polisacárido que se somete a la gelificación de los iones de calcio 6-8. Hidrogeles de alginato forma a una concentración de 0,25% w / v fueron las más permisivas de la cultura del folículo, y mantiene la más alta competencia en el desarrollo 9. Hidrogeles de alginato no son degradables, por lo tanto un aumento en los resultados de folículos de diámetro en una fuerza de compresión en el folículo que pueden afectar el crecimiento del folículo 10. Hemos desarrollado posteriormente un sistema de cultivo basado en una red de fibrina, alginato de interpenetración (FA-IPN), en el que se gelifican una mezcla de fibrina y alginato de forma simultánea. Esta combinación proporciona un entorno dinámico mecánico debido a que ambos componentes contribuyen a la rigidez de la matriz inicial, sin embargo, las proteasas secretado por el folículo creciente degradación de fibrina en la matriz de alginato dejando sólo para brindar apoyo. Con el IPN, el contenido de alginato se puede reducir por debajo del 0,25%, lo que no es posible con alginato solo 5. Por lo tanto, cuando el folículo se expande, se experimentará una fuerza de compresión reducida debido a la reducida contenido de sólidos. En este documento, se describe un método de encapsulación y un sistema de cultivo in vitro de los folículos ováricos en un FA-IPN. El entorno mecánico dinámico simula el entorno del ovario natural en el que residen los pequeños folículos en la corteza rígida y pasar a una médula más permisiva, ya que aumentan de tamaño 11. El componente degradable puede ser particularmente importante para la traducción clínica con el fin de apoyar el mayor de 10 en 6 veces el aumento en el volumen que los folículos humanos normalmente pasan en vivo.

Un nuevo método para la encapsulación de los folículos ováricos en 3D de fibrina-alginato red interpenetrante se describe. Este sistema combina un soporte estructural a la degradación proteolítica de apoyar el desarrollo de folículos inmaduros para producir ovocitos maduros. Este método puede ser aplicado a los agregados de cultivo celular para mantener contactos célula-célula, sin limitar la expansión.

Un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la Cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema

El folículo ovárico es la unidad funcional del ovario que secreta hormonas sexuales y favorece la maduración del ovocito. Las técnicas de folículos in vitro proporcionan...

Este protocolo describe un nuevo método de encapsulación de folículos ováricos en una red interpenetrante de fibrina-alginato para cultivo in vitro. El folículo secundario consiste en un ovocito ubicado centralmente rodeado por varias capas de células somáticas, las cuales apoyan el desarrollo del ovocito; la encapsulación del folículo y su cultivo en un entorno tridimensional permiten la expansión folicular al tiempo que favorecen la comunicación entre múltiples compartimentos celulares y mantienen la estructura esférica del folículo. En el primer paso de este protocolo, aísle folículos secundarios de ovarios de ratón de 16 días de edad mediante el método de la gota.Lave y transfiera los folículos a una solución de encapsulación. Aspire cada folículo con solución de alginato de fibrinógeno mediante pipeta hacia una solución de trombina y calcio, y permita que las perlas se entrecrucen para el método de paraform. Transfiera folículos individuales a gotas de solución de alginato de fibrinógeno sobre un portaobjetos de vidrio recubierto con paraform y agregue la solución de trombina para iniciar el entrecruzamiento F-A-I-P-N.Luego, transfiera los folículos encapsulados a un medio de crecimiento e image el folículo encapsulado en la IPN de FA. Dado que este sistema combina soporte estructural con respuesta biológica para favorecer el crecimiento y desarrollo de folículos inmaduros que producen óvulos, podría aplicarse para el cultivo de agregados celulares con el fin de mantener los contactos célula-célula sin limitar la expansión. Hola, mi nombre es Lonnie Shea y, mediante una colaboración con Three Fold Drip, hemos desarrollado un sistema de cultivo para la maduración in vitro de folículos ováricos.Y este estudio de cultivo refleja realmente una verdadera colaboración entre bioingeniería y biología reproductiva. Y hoy, las personas que desarrollaron este sistema de cultivo les presentarán los métodos. Primero, Ariel Checkoff es un investigador posdoctoral en bioingeniería que desarrolló el sistema de biomateriales.A continuación está Minsu, quien es biólogo reproductivo en el Departamento de Obstetricia y Ginecología, y desarrolló los procedimientos de manipulación del tejido ovárico. Juntos, les presentarán los métodos para encapsular y cultivar realmente el tejido ovárico. La principal ventaja de la técnica descrita frente a los métodos existentes, como el cultivo estándar en superficies plásticas planas, es que el sistema de alginato de fibrina soporta la arquitectura tridimensional del folículo mientras proporciona un entorno mecánicamente dinámico para el folículo en rápida expansión.El microentorno mecánico dinámico en el hombre actual proporciona ventajas adicionales cuando esta tecnología se traslada desde el modelo masivo a la posible aplicación clínica, ya que en el folículo humano se requiere un crecimiento mucho más extenso para producir óvulos maduros y fértiles para obtener resultados óptimos. Realice todas las disecciones en medio basado en L-15 para el control de pH, sobre platina calentada a 37 grados Celsius para el control de temperatura y en una cabina de flujo laminar para minimizar la contaminación bacteriana. Transfiera los ovarios recién diseccionados a una nueva placa de Petri de 35 milímetros con uno a dos mililitros de medio de mantenimiento que contenga 0,1 % de colagenasa y 0,1 % de DNAsa, e incube durante 15 minutos en una incubadora de dióxido de carbono.Lave las muestras en DM para eliminar la colagenasa y luego transfiéralas a una placa de Petri de 35 milímetros con DM fresco con el fin de aislar los folículos del ovario. Separe suavemente los folículos del ovario completo utilizando 2 agujas de calibre 28 5 8 unidas a jeringas de insulina. Elimine la mayor cantidad posible de células del estroma sin dañar la integridad del folículo.Disecar de 20 a 40 folículos secundarios con un diámetro de 130 a 150 micrones por ovario. Estos folículos suelen tener de dos a tres capas de células granulosas. Ahora, en un platillo de FIV, añadir un mililitro de mm en el pocillo central y tres mililitros de mm en el anillo exterior.Transfiera los folículos intactos con la pipeta al anillo externo de la placa de FIV. Mantenga esta placa de FIV dentro del incubador a 37 grados Celsius y 5% de dióxido de carbono. Después de recolectar todos los folículos.Examine los muestras bajo un microscopio estereoscópico con un aumento de cinco a ocho veces, y seleccione folículos de tamaño entre 130 y 150 micrones que presenten una morfología saludable, incluyendo dos a tres capas de células granulosas, ausencia de separación entre el ovocito y las células granulosas, y ovocitos íntegros y redondos. Transfiera los folículos sanos al centro de otro plato de FIV para su encapsulación. Para el método de gota de encapsulación folicular, agregue un mililitro de solución de trombina de 50 unidades internacionales por mililitro en el pocillo central de un plato de FIV, descongele y mantenga la solución stock de fibrinógeno sobre hielo.Y lleve el fibrinógeno a temperatura ambiente justo antes de la encapsulación. Inmediatamente antes del uso. Prepare la solución de alginato con fibrinógeno mezclando PBS al 1x, alginato al 0,5% y 50 miligramos por mililitro.Fibrinógeno en una proporción de dos a uno a uno en un tubo microcentrífugo estéril de 1,7 mililitros. Vortex suavemente y centrifugar la solución ligeramente turbia para disminuir la evaporación. Apague la etapa de calentamiento del microscopio estereoscópico en la esquina del anillo externo de una placa de FIV coloque.90 microlitros de solución de alginato de fibrinógeno para encapsulación y una segunda gota de 10 microlitros para un paso de lavado. Transfiera de 10 a 15 folículos a la gota de 10 microlitros con una cantidad mínima de medio de cultivo, y mézclelos rápidamente con una cantidad mínima de solución; luego transfiera todos los folículos a la gota de 90 microlitros y mezcle. Aspire un folículo dentro de cinco microlitros de solución de alginato de fibrinógeno usando una punta de 10 microlitros y libere la solución de alginato de fibrinógeno junto con el folículo en la solución de trombina en el centro del plato de FIV. Continúe repitiendo este paso hasta que todos los folículos estén encapsulados.Deje reposar las perlas durante cinco a siete minutos para entrecruzar el gel en la solución de calcio de trombina. Las perlas se oscurecerán a medida que se forme el fibrinógeno. Transfiera las perlas al medio de mantenimiento comenzando por las más oscuras.Primero, incubar de 15 a 30 minutos a 37 grados Celsius y eliminar el trombina restante mediante lavado. Finalmente, transferir las perlas a una placa de cultivo e imaginar. Preparar inmediatamente la solución de alginato de fibrinógeno mezclando alginato al 0,5% y 50 miligramos por mililitro.Fibrinógeno en una proporción uno a uno en un tubo estéril de microcentrífuga de 1,7 mililitros; pipetee gotas de 7,5 microlitros de la mezcla de fibrinógeno y alginato sobre el vidrio recubierto con parafina. Deslice con un espaciador de tres milímetros y transfiera un folículo a cada gota, con una cantidad mínima de medio.Añada 7,5 microlitros de solución de trombina a cada gota sin tocar ni mezclar la gota con el folículo, porque el gel se forma casi instantáneamente. Cubra los geles con el segundo vidrio recubierto de parafilm. Deslice y coloque en un recipiente de 100 milímetros boca abajo en una incubadora durante cinco minutos.Transfiera las perlas adhesivas al medio de mantenimiento utilizando fórceps si es necesario, y luego a un pocillo de cultivo cada dos días. Observe los folículos cultivados mediante un microscopio óptico y mida el diámetro del folículo con ImageJ. Además, reemplace la mitad del medio de crecimiento con medio de crecimiento recién equilibrado cada dos días. Después de ocho días de cultivo, el hidrogel debería aparecer transparente debido a la degradación completa de los componentes de fibrina, y los folículos pueden alcanzar sus dimensiones finales superiores a 400 micrones de diámetro. Retire el medio de crecimiento y agregue 100 microlitros de 10 unidades internacionales por mililitro.El alginato lia en medio alfa para degradar el alginato. Coloque la placa en un incubador durante 25 a 30 minutos. Luego, retire los folículos de las perlas parcialmente disueltas con una punta de extremo romo.Transfiera los folículos al anillo externo de una placa de FIV con medio de disección para lavar el alginato, y luego transfiéralos al anillo interno. A continuación, transfiera los folículos antrales al anillo externo y luego al anillo interno de la placa de FIV con medio de maduración que contenga HCG y EGF, e incube en una incubadora de dióxido de carbono durante 15 a 16 horas. Examine los cultivos para evaluar la expansión de las células del cumulus y eliminar las células del cumulus.Añada la solución IDE más concentrada hasta alcanzar una concentración final de 0,1 miligramo por mililitro e incube durante dos o tres minutos a 37 grados Celsius con 5% de dióxido de carbono. Aspire con la pipeta bucal para liberar. Finalmente, determine el estadio de maduración de los ovocitos a partir de las células del cumulus mediante microscopio.El alginato es un biomaterial natural adecuado para el cultivo in vitro de folículos debido a sus características biofísicas y bioquímicas suaves, como el tamaño de malla, la rigidez controlable y la inercia biológica. Los folículos encapsulados pequeños experimentan una fuerza compresiva baja en el alginato al comienzo del cultivo. Sin embargo, a medida que el folículo se expande, el volumen desplazado en la perla aumenta, lo que resulta en una mayor fuerza compresiva en la dirección opuesta a la expansión del folículo.Las cadenas de polímeros individuales están completamente enredadas en la solución de alginato de fibrilina antes del entrecruzamiento. Ambos componentes del F-A-I-P-N comienzan a entrecruzarse inmediatamente al exponerse a la mezcla de trombina y calcio; los folículos degradan el componente de fibrina del F-A-I-P-N durante el período de cultivo, lo cual se demuestra mediante un círculo claro alrededor del folículo. La arquitectura tridimensional del folículo es sostenida por el alginato remanente.Estas imágenes muestran el crecimiento de folículos secundarios en F-A-I-P-N a lo largo del tiempo desde el día 0, 4, 6 y hasta la etapa M dos X. Con cuerpo polar, una pronina es un inhibidor de proteasas que puede añadirse al medio de cultivo para ralentizar la degradación del fibrinógeno. Cuando se añaden 0,01 UI de aprotinina por mililitro al medio de cultivo durante los primeros cuatro días, los folículos no pueden degradar la matriz. Y tras la eliminación de la proteína, los folículos reanudan su crecimiento y alcanzan la etapa antral.Sin embargo, los folículos cultivados inicialmente en una concentración más alta de aprotinina presentaron un crecimiento inhibido. Hoy hemos demostrado una nueva técnica para la encapsulación variable de folículos y su cultivo in vitro en una red tridimensional de alginato de fibrina. El sistema no solo mantiene la estructura intacta del folículo durante el cultivo, sino que también favorece con éxito la génesis folicular in vitro, lo que resulta en un sitio O de dos etapas M.Esta tecnología es importante para descubrir cómo funciona el folículo ovárico y tiene el potencial de ofrecer opciones de fertilidad a pacientes jóvenes con cáncer. Más en general, este sistema de cultivo puede utilizarse para el cultivo de grupos celulares o para el cultivo de células mientras se organizan en estructuras. Estos sistemas de cultivo 3D proporcionarán herramientas valiosas para analizar molecularmente el crecimiento tisular.

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Cultivo de células normales en sus tres dimensiones contexto representa un método alternativo para estudiar los primeros eventos necesarios para la transformación celular y tumorigénesis. Este método se utiliza para producir los ovarios normales y las células del oviducto para estudiar los eventos tempranos en la formación de cáncer de ovario.

Los hidrogeles de alginato para la cultura del órgano en tres dimensiones de los ovarios y oviductos

Este video describe los protocolos para encapsular complejos de cúmulos-ovocitos porcinos (COC) en perlas de fibrina-alginato para establecer un cultivo 3D. Este sistema de maduración in vitro mantiene la comunicación normal de célula a célula, asegurando la maduración de los ovocitos y conservando la viabilidad.

Cultivo 3D de COC porcinos: un procedimiento para encapsular complejos de ovocitos cúmulos en perlas de hidrogel polimérico de fibrina-alginato

En este video, describimos un protocolo para la encapsulación de ovocitos porcinos en microbiorreactores hidrofóbicos.

Sistema de microbiorreactor de mármol líquido: un protocolo de cultivo en 3D para la encapsulación de ovocitos porcinos

Este protocolo describe el cultivo primario / co-cultivo de tejido ovárico ratón, utilizando los ovarios de ratones recién nacidos y los folículos ováricos individuales de ratones prepúberes. Las técnicas de cultivo de apoyar el desarrollo de una manera altamente fisiológica, lo que permite la investigación del efecto de los agentes extrínsecos en el ovario, y de las interacciones entre los folículos ováricos.

Cultura y Co-cultura de ratón ovarios y los folículos ováricos

Aquí se presentan dos protocolos para la encapsulación de ovocitos porcinos en condiciones de cultivo 3D. En el primero, los complejos cúmulos-oocitos (COC) se encapsulan en perlas de fibrina-alginato. En el segundo, se encierran con partículas fluoradas de etileno propileno propileno (microbiorreos). Ambos sistemas garantizan condiciones óptimas para mantener su organización 3D.

Hidrogeles de Alginato degradados proteolíticamente y microbiorreactores hidrófobos para encapsulación de oocitos porcinos

Este protocolo describe un nuevo modelo de cultivo tridimensional (3-D) que utiliza un hidrogel de hialuronano unido a tiramina para encapsular y cultivar folículos preantrales del ovario de ratón. También detallamos dos enfoques para la criopreservación de folículos ováricos por vitrificación.

Aplicación de un nuevo hidrogel de hialuronano para el cultivo tridimensional de folículos y metodología para la criopreservación de folículos ováricos de ratón

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Producción y uso de moldes de agarosa personalizables para cultivo de folículos ováricos de ratón sin andamios

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Investigación del microambiente ovárico: métodos para aislamiento, cultivo 2D y cultivo organoide de células somáticas ováricas de ratón

Se describe un método para la preparación de una matriz de tres dimensiones que consiste en colágeno tipo I y fibroblastos primarios humanos. Este gel organotípicos sirve como un sustrato útil para evaluar la migración de células invasivas debido a que imita las características básicas del estroma y se presta a muchas formas de microscopía.

El colágeno organotípicos I del ensayo: Una plataforma maleable para evaluar el comportamiento celular en un contexto de 3 dimensiones

Monocapas auto-ensambladas (SAMs) formado por largas cadenas de alcanos tioles en oro proporcionan sustratos bien definidos para la formación de los patrones de proteínas y el confinamiento de la célula. Impresión por microcontacto de hexadecanethiol con un polidimetilsiloxano (PDMS) sello seguido por el relleno con un glicol terminada alcano tiol monómero produce un patrón en el que las proteínas y las células de absorber sólo a la región hexadecanethiol sellado.

La creación de dos dimensiones con dibujos sustratos para el confinamiento de proteínas y células

Aprenda a encapsular folículos ováricos en una red tridimensional de fibrina-alginato para cultivo in vitro. Este método mantiene la arquitectura folicular y la comunicación celular durante la maduración del oocito.

Un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la Cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema (Video) | JoVE Journal

Un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la Cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema

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