Name: Un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la Cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 37 s
Description: Aprenda a encapsular folículos ováricos en una red tridimensional de fibrina-alginato para cultivo in vitro. Este método mantiene la arquitectura folicular y la comunicación celular durante la maduración del oocito.

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Este trabajo fue financiado por el NIH (U54HD41857 y PL1EB008542, un procesador Core P30 Biomateriales en el Consorcio Oncofertility conceder Hoja de Ruta).

<ol><li>Cortvrindt, R., Smitz, J., VanSteirteghem, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vitro+maturation%2C+fertilization+and+embryo+development+of+immature+oocytes+from+early+preantral+follicles+from+prepuberal+mice+in+a+simplified+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">In-vitro maturation, fertilization and embryo development of immature oocytes from early preantral follicles from prepuberal mice in a simplified culture system.</a> Human Reproduction. 11, 2656-2666 (1996).</li>
<li>Smitz, J., Cortvrindt, R., Hu, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+growth+factor+combined+with+recombinant+human+chorionic+gonadotrophin+improves+meiotic+progression+in+mouse+follicle-enclosed+oocyte+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Epidermal growth factor combined with recombinant human chorionic gonadotrophin improves meiotic progression in mouse follicle-enclosed oocyte culture.</a> Human Reproduction. 13, 664-669 (1998).</li>
<li>Xu, M., Banc, A., Woodruff, T. K., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+Follicle+Growth+and+Oocyte+Maturation+by+Culture+in+Alginate+Hydrogel+Following+Cryopreservation+of+the+Ovary+or+Individual+Follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Bioengineering%22%5BJournal%5D)">Secondary Follicle Growth and Oocyte Maturation by Culture in Alginate Hydrogel Following Cryopreservation of the Ovary or Individual Follicles.</a> Biotechnology and Bioengineering. 103, 378-386 (2009).</li>
<li>Smitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+achievements+and+future+research+directions+in+ovarian+tissue+culture%2C+in+vitro+follicle+development+and+transplantation%3A+implications+for+fertility+preservation%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Update%22%5BJournal%5D)">Current achievements and future research directions in ovarian tissue culture, in vitro follicle development and transplantation: implications for fertility preservation.</a> Human Reproduction Update. 16, 395-414 (2010).</li>
<li>Shikanov, A., Xu, M., Woodruff, T. K., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interpenetrating+fibrin-alginate+matrices+for+in+vitro+ovarian+follicle+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Interpenetrating fibrin-alginate matrices for in vitro ovarian follicle development.</a> Biomaterials. 30, 5476-5485 (2009).</li>
<li>West, E. R., Xu, M., Woodruff, T. K., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+properties+of+alginate+hydrogels+and+their+effects+on+in+vitro+follicle+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Physical properties of alginate hydrogels and their effects on in vitro follicle development.</a> Biomaterials. 28, 4439-4448 (2007).</li>
<li>Kreeger, P. K., Fernandes, N. N., Woodruff, T. K., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+mouse+follicle+development+by+follicle-stimulating+hormone+in+a+three-dimensional+in+vitro+culture+system+is+dependent+on+follicle+stage+and+dose%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Regulation of mouse follicle development by follicle-stimulating hormone in a three-dimensional in vitro culture system is dependent on follicle stage and dose.</a> Biology of Reproduction. 73, 942-950 (2005).</li>
<li>Pangas, S. A., Saudye, H., Shea, L. D., Woodruff, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approach+for+the+three-dimensional+culture+of+granulosa+cell-oocyte+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Novel approach for the three-dimensional culture of granulosa cell-oocyte complexes.</a> Tissue Engineering. 9, 1013-1021 (2003).</li>
<li>Xu, M., West, E., Shea, L. D., Woodruff, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+stage-specific+permissive+in+vitro+culture+environment+for+follicle+growth+and+oocyte+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Identification of a stage-specific permissive in vitro culture environment for follicle growth and oocyte development.</a> Biology of Reproduction. 75, 916-923 (2006).</li>
<li>Xu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulated+Three-Dimensional+Culture+Supports+Development+of+Nonhuman+Primate+Secondary+Follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Encapsulated Three-Dimensional Culture Supports Development of Nonhuman Primate Secondary Follicles.</a> Biology of Reproduction. 81, 587-594 (2009).</li>
<li>West, E. R., Shea, L. D., Woodruff, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+the+follicle+micro+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Reproductive+Medicine%22%5BJournal%5D)">Engineering the follicle micro environment.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 25, 287-299 (2007).</li>
<li>Xu, M., Kreeger, P. K., Shea, L. D., Woodruff, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-engineered+follicles+produce+live%2C+fertile+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Tissue-engineered follicles produce live, fertile offspring.</a> Tissue Engineering. 12, 2739-2746 (2006).</li>
<li>Ebisch, I. M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+the+role+of+the+plasminogen+activator+system+and+vascular+endothelial+growth+factor+in+subfertility%5BTitle%5D)+AND+%22Fertility+and+Sterility%22%5BJournal%5D)">Review of the role of the plasminogen activator system and vascular endothelial growth factor in subfertility.</a> Fertility and Sterility. 90, 2340-2350 (2008).</li>
</ol>

El folículo ovárico presenta un método de encapsulación en FA-IPN permite cultivo de folículos en un entorno 3D in vitro. A FA-IPN es un proceso dinámico, de células sensibles a la matriz en la que las propiedades mecánicas iniciales están determinadas por la combinación de ambos fibrina y alginato. Durante el cultivo, el folículo encapsulado activa proteasas que degradan el único componente de la IPN, la fibrina, que se traduce en una rigidez gel disminuyendo gradualmente que es aportado exclusivamente por el ...

<table><tbody><tr><td>Fetuína</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F3385</td><td></td></tr><tr><td>SFB</td><td>Invitrogen</td><td>10082-139</td><td></td></tr><tr><td>Aprotinina</td><td>Roche Group</td><td>10236624001</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Wako Pure Chemical Industries, Ltd.</td><td>039-00475</td><td>40 mM</td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A412</td><td></td></tr><tr><td>rFSH</td><td>Instituto Nacional de la Diabetes y las Enfermedades Digestivas y Renales</td><td></td><td></td></tr><tr><td>hCG</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CG-5</td><td></td></tr><tr><td>Hialuronidasa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1603</td><td></td></tr><tr><td>ITS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I1884-1VL</td><td></td></tr><tr><td>L-15</td><td>GIBCO, por Life Technologies</td><td>11415</td><td></td></tr><tr><td>&amp;alpha;MEM+Gluta MAX</td><td>GIBCO, por Life Technologies</td><td>32561</td><td></td></tr><tr><td>Pen-Estrepto</td><td>Cellgro</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>TBS</td><td>Pierce, Thermo Scientific</td><td>28379</td><td></td></tr><tr><td>Kit de fibrina Tisseel</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td>921030</td><td></td></tr><tr><td>Alginato de sodio</td><td>FMC BioPolymers</td><td>LF200DL</td><td>Mw 418kDa</td></tr></tbody></table>

un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema

A Method for Ovarian Follicle Encapsulation and Culture in a Proteolytically Degradable 3 Dimensional System

El folículo ovárico es la unidad funcional del ovario que segrega las hormonas sexuales y apoya la maduración de ovocitos. En las técnicas in vitro de folículos proporcionar una herramienta para el desarrollo del folículo modelo para investigar la biología básica, y además se está desarrollando como una técnica para preservar la fertilidad en el clínica 1-4. Nuestro sistema de cultivo in vitro cuenta con hidrogeles con el fin de imitar el ambiente de ovario nativos mediante el mantenimiento de la arquitectura folicular en 3D, interacciones célula-célula y la señalización paracrina que el desarrollo del folículo directa 5. Anteriormente, los folículos se cultivaron con éxito en alginato, un derivado de algas inertes polisacárido que se somete a la gelificación de los iones de calcio 6-8. Hidrogeles de alginato forma a una concentración de 0,25% w / v fueron las más permisivas de la cultura del folículo, y mantiene la más alta competencia en el desarrollo 9. Hidrogeles de alginato no son degradables, por lo tanto un aumento en los resultados de folículos de diámetro en una fuerza de compresión en el folículo que pueden afectar el crecimiento del folículo 10. Hemos desarrollado posteriormente un sistema de cultivo basado en una red de fibrina, alginato de interpenetración (FA-IPN), en el que se gelifican una mezcla de fibrina y alginato de forma simultánea. Esta combinación proporciona un entorno dinámico mecánico debido a que ambos componentes contribuyen a la rigidez de la matriz inicial, sin embargo, las proteasas secretado por el folículo creciente degradación de fibrina en la matriz de alginato dejando sólo para brindar apoyo. Con el IPN, el contenido de alginato se puede reducir por debajo del 0,25%, lo que no es posible con alginato solo 5. Por lo tanto, cuando el folículo se expande, se experimentará una fuerza de compresión reducida debido a la reducida contenido de sólidos. En este documento, se describe un método de encapsulación y un sistema de cultivo in vitro de los folículos ováricos en un FA-IPN. El entorno mecánico dinámico simula el entorno del ovario natural en el que residen los pequeños folículos en la corteza rígida y pasar a una médula más permisiva, ya que aumentan de tamaño 11. El componente degradable puede ser particularmente importante para la traducción clínica con el fin de apoyar el mayor de 10 en 6 veces el aumento en el volumen que los folículos humanos normalmente pasan en vivo.

Un nuevo método para la encapsulación de los folículos ováricos en 3D de fibrina-alginato red interpenetrante se describe. Este sistema combina un soporte estructural a la degradación proteolítica de apoyar el desarrollo de folículos inmaduros para producir ovocitos maduros. Este método puede ser aplicado a los agregados de cultivo celular para mantener contactos célula-célula, sin limitar la expansión.

Un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la Cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema

El folículo ovárico es la unidad funcional del ovario que secreta hormonas sexuales y favorece la maduración del ovocito. Las técnicas de folículos in vitro proporcionan...

Este protocolo describe un nuevo método de encapsulación de folículos ováricos en una red interpenetrante de fibrina-alginato para cultivo in vitro. El folículo secundario consiste en un ovocito ubicado centralmente rodeado por varias capas de células somáticas, las cuales apoyan el desarrollo del ovocito; la encapsulación del folículo y su cultivo en un entorno tridimensional permiten la expansión folicular al tiempo que favorecen la comunicación entre múltiples compartimentos celulares y mantienen la estructura esférica del folículo. En el primer paso de este protocolo, aísle folículos secundarios de ovarios de ratón de 16 días de edad mediante el método de la gota.Lave y transfiera los folículos a una solución de encapsulación. Aspire cada folículo con solución de alginato de fibrinógeno mediante pipeta hacia una solución de trombina y calcio, y permita que las perlas se entrecrucen para el método de paraform. Transfiera folículos individuales a gotas de solución de alginato de fibrinógeno sobre un portaobjetos de vidrio recubierto con paraform y agregue la solución de trombina para iniciar el entrecruzamiento F-A-I-P-N.Luego, transfiera los folículos encapsulados a un medio de

a-method-for-ovarian-follicle-encapsulation-culture-proteolytically

Research

Investigación

JoVE Journal

Bioengineering

Bioingeniería

Cultivo de células normales en sus tres dimensiones contexto representa un método alternativo para estudiar los primeros eventos necesarios para la transformación celular y tumorigénesis. Este método se utiliza para producir los ovarios normales y las células del oviducto para estudiar los eventos tempranos en la formación de cáncer de ovario.

Los hidrogeles de alginato para la cultura del órgano en tres dimensiones de los ovarios y oviductos

Este video describe los protocolos para encapsular complejos de cúmulos-ovocitos porcinos (COC) en perlas de fibrina-alginato para establecer un cultivo 3D. Este sistema de maduración in vitro mantiene la comunicación normal de célula a célula, asegurando la maduración de los ovocitos y conservando la viabilidad.

Cultivo 3D de COC porcinos: un procedimiento para encapsular complejos de ovocitos cúmulos en perlas de hidrogel polimérico de fibrina-alginato

En este video, describimos un protocolo para la encapsulación de ovocitos porcinos en microbiorreactores hidrofóbicos.

Sistema de microbiorreactor de mármol líquido: un protocolo de cultivo en 3D para la encapsulación de ovocitos porcinos

Este protocolo describe el cultivo primario / co-cultivo de tejido ovárico ratón, utilizando los ovarios de ratones recién nacidos y los folículos ováricos individuales de ratones prepúberes. Las técnicas de cultivo de apoyar el desarrollo de una manera altamente fisiológica, lo que permite la investigación del efecto de los agentes extrínsecos en el ovario, y de las interacciones entre los folículos ováricos.

Cultura y Co-cultura de ratón ovarios y los folículos ováricos

Aquí se presentan dos protocolos para la encapsulación de ovocitos porcinos en condiciones de cultivo 3D. En el primero, los complejos cúmulos-oocitos (COC) se encapsulan en perlas de fibrina-alginato. En el segundo, se encierran con partículas fluoradas de etileno propileno propileno (microbiorreos). Ambos sistemas garantizan condiciones óptimas para mantener su organización 3D.

Hidrogeles de Alginato degradados proteolíticamente y microbiorreactores hidrófobos para encapsulación de oocitos porcinos

Este protocolo describe un nuevo modelo de cultivo tridimensional (3-D) que utiliza un hidrogel de hialuronano unido a tiramina para encapsular y cultivar folículos preantrales del ovario de ratón. También detallamos dos enfoques para la criopreservación de folículos ováricos por vitrificación.

Aplicación de un nuevo hidrogel de hialuronano para el cultivo tridimensional de folículos y metodología para la criopreservación de folículos ováricos de ratón

Describimos métodos para cultivar folículos ováricos en un novedoso molde de agarosa sin andamios que complementan la gametogénesis in vitro .

Producción y uso de moldes de agarosa personalizables para cultivo de folículos ováricos de ratón sin andamios

Describimos métodos para aislar células somáticas ováricas de ratón a partir de una fracción del ovario enriquecida con estroma y para generar organoides somáticos ováricos de ratón utilizando un enfoque sin andamiaje.

Investigación del microambiente ovárico: métodos para aislamiento, cultivo 2D y cultivo organoide de células somáticas ováricas de ratón

Se describe un método para la preparación de una matriz de tres dimensiones que consiste en colágeno tipo I y fibroblastos primarios humanos. Este gel organotípicos sirve como un sustrato útil para evaluar la migración de células invasivas debido a que imita las características básicas del estroma y se presta a muchas formas de microscopía.

El colágeno organotípicos I del ensayo: Una plataforma maleable para evaluar el comportamiento celular en un contexto de 3 dimensiones

Monocapas auto-ensambladas (SAMs) formado por largas cadenas de alcanos tioles en oro proporcionan sustratos bien definidos para la formación de los patrones de proteínas y el confinamiento de la célula. Impresión por microcontacto de hexadecanethiol con un polidimetilsiloxano (PDMS) sello seguido por el relleno con un glicol terminada alcano tiol monómero produce un patrón en el que las proteínas y las células de absorber sólo a la región hexadecanethiol sellado.

La creación de dos dimensiones con dibujos sustratos para el confinamiento de proteínas y células

Aprenda a encapsular folículos ováricos en una red tridimensional de fibrina-alginato para cultivo in vitro. Este método mantiene la arquitectura folicular y la comunicación celular durante la maduración del oocito.

Un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la Cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema (Video) | JoVE Journal

Un método para la encapsulación de los folículos ováricos y la Cultura en un proteolíticamente degradables tres dimensiones del sistema

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