Name: Placa Sólida basado en la restricción dietética Caenorhabditis elegans /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 13 s
Description: Aprende a realizar restricción dietética en placas sólidas con Caenorhabditis elegans usando bacterias inactivadas. Este protocolo permite estudiar los efectos sobre longevidad, reproducción y metabolismo en este organismo modelo.

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Este trabajo fue apoyado por un premio de piloto del Centro de choque Nathan (P30 AG13283) y una subvención R01 (R01 AG028516) del Instituto Nacional sobre el Envejecimiento (NIA) para A.-LH

1. El establecimiento de una curva de calibración para la estimación de las concentraciones de bacterias En esta sección se describe un método para la estimación de la concentración de bacterias de cualquier cepa determinada bacteria (por ejemplo, OP50, HT115) que se utilizará como fuente de alimento para los experimentos de restricción dietética en C. elegans. Las curvas de calibración independientes deben ser establecidos para cada cepa de la bacteria utilizada. <ol><li> Inocular una colonia de E. coli OP50 bacterias seleccionar de una racha fresca de bacterias en agar LB en 3 ml de caldo LB líquido. </li><li> Lugar OP50 cultura en 37 ° C agitador y permitir que las bacterias crecen durante la noche. </li><li> Prepare serie 2 diluciones de la suspensión bacteriana de la cultura durante la noche (2x, 4x, 8x, 16x, 32x). </li><li> Medir la absorbancia (densidad óptica) de cada dilución a 600 nm por espectrofotometría por triplicado. </li><li> Volver a diluir cada suspensión bacteriana 1.000.000 veces (1000 veces la dilución en dos ocasiones). </li><li> Propagación 0,4 ml de suspensión bacteriana de cada dilución de manera uniforme sobre una placa de agar LB 100 mm. </li><li> Colocar placas de LB con OP50 en una incubadora a 37 ° C durante 18-24 horas. </li><li> Cuente el número de colonias de bacterias cultivadas en cada plato. El recuento de colonias se usan para calcular UFC (unidades formadoras de colonias) por ml para cada muestra. </li><li> La relación entre la medida OD 600 valores y OP50 concentraciones de bacterias puede ser establecida por el trazado de OD 600 en función de la concentración de bacterias (ufc / ml) y se realiza un análisis de regresión lineal (Figura 1). </li></ol> Soluciones: <table border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> Caldo Luria (LB), 1 litro: </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> Bacto-triptona </td></tr><tr><td> 5 g </td><td> Extracto de levadura </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> NaCl </td></tr></tbody></table> Añadir agua desionizada a 1L. Autoclave y almacenar a temperatura ambiente. 2. Preparación de la placa sólida basada en la dieta de restricción de giro (DEG), las placas En esta sección se describe la preparación de platos para su uso en base placa sólida-la dieta de restricción de giro (DEG) los experimentos. Normalmente, se considera una concentración de bacterias de 1 x 10 11 UFC / mL como la condición de la alimentación ad libitum y 1 x 10 8 UFC / mL como la condición de una alimentación óptima DR para este método. Sin embargo, las concentraciones de 4-6 diferentes bacterias pueden ser necesarios para establecer una completa relación dosis-dependiente de DEG y sus respuestas. <ol><li> Inocular una colonia de E. Coli OP50 bacterias en 3 ml de caldo LB líquido. </li><li> Lugar de la cultura OP50 en 37 ° C agitador y permitir que las bacterias crezcan durante 6-8 horas. </li><li> La transferencia de la cultura OP50 a un nuevo frasco contiene 500 ml de caldo de LB, y el lugar de la cultura OP50 de vuelta en 37 º C durante la noche coctelera. </li><li> Mida el diámetro exterior de 600 de la cultura OP50 para determinar la concentración de bacterias (la concentración se calcula utilizando la curva de calibración generada en la parte 1). Diluciones adecuadas puede ser necesario para una medición precisa de la absorción. </li><li> Pellet OP50 bacterias por centrifugación a 1.500 g durante 20 minutos. </li><li> Volver a suspender las bacterias a una concentración de 1 x 10 12 UFC / ml. </li><li> Preparar 10 mL cultivo de bacterias en seis diferentes concentraciones: 1 x 10 12, 10 11, 10 10, 10 9, 10 8, 10 7 ufc / ml. </li><li> Pipetear 0,2 ml de cultivo de bacterias en el centro de una placa de 60 mm solidificado NGM. Evite tocar la superficie de la placa con la punta de la pipeta, como rasguños en la superficie permite a los gusanos se introducen en las placas de agar. </li><li> Coloque las placas en incubadora a 37 ° C durante 1 hora. </li><li> Aplicar 10μL de 100mg/ml carbenicilina y 10 l de kanamicina 50mg/ml a cada placa para detener el crecimiento de las bacterias. </li><li> Tienda placas con diferentes concentraciones de los antibióticos bacterias muertas a 4 ° C para su uso futuro (hasta un mes). Es importante preparar y almacenar las placas suficiente para que el experimento planeado todo por lo menos 1-2 días por venir. Utilizando el mismo lote de placas para los experimentos de todo es preferible. </li><li> Para verificar la viabilidad de las bacterias, sacar algunas bacterias de las placas de DEG y la extendió sobre una placa de NGM vacío con carbenicilina y kanamicina. Colocar la placa en incubadora a 37 ° C durante 6-8 horas y luego verificar el crecimiento de las bacterias (no el crecimiento de bacterias debe ser observado). </li></ol> Soluciones <table border="1"><tbody><tr><td colspan="2"> Nematodo de crecimiento de los medios (NGM), 1 litro: </td></tr><tr><td> 3 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 2,5 g </td><td> Bacto-peptona </td></tr><tr><td> 20g </td><td> Agar </td></tr></tbody></table>ove_content "Autoclave&gt; durante 40 minutos y dejar enfriar a 65 ° C, a continuación, añadir: <table border="1"><tbody><tr><td> 1 mL </td><td> 1 M MgSO 4 </td></tr><tr><td> 1 mL </td><td> 1 M de CaCl2 </td></tr><tr><td> 1 mL </td><td> 5 mg / ml de colesterol </td></tr><tr><td> 25 ml </td><td> Fosfato de Potasio 1 M, pH 6,0 </td></tr></tbody></table> Inmediatamente vierta líquido en NGM 60 mm x 15 mm placas de Petri en alícuotas de 10 mL 3. La creación de experimentos DEG Para la mayoría de los estudios relacionados con el DEG, como el análisis de duración de la vida y perfiles de la fertilidad, la preparación de una edad sincronizado población de gusanos es esencial. Para otros estudios, sólo la transferencia de los gusanos de una placa normal OP50 a una placa de DEG para iniciar la restricción dietética. En esta sección, un protocolo para establecer un análisis de ciclo de vida para los animales de DEG se describe como un ejemplo. <ol><li> Utilizar un selector de gusano de platino para la transferencia de 20 a 30 adultos reproductivamente activos en varias placas NGM regular con OP50. Dependiendo de la cantidad de huevos necesarios para los experimentos, los más adultos pueden ser necesarias. </li><li> Dejar las placas a 20 ° C durante 4 horas para permitir la puesta de huevos. </li><li> Retire los adultos de la placa. Las placas deben ser inspeccionados visualmente para los huevos. </li><li> Dejar las placas a 20 ° C y permitir que la progenie de convertirse en la etapa adulta Late-L4/day 1. Por lo general, este es de 3 días para que los gusanos N2 tipos silvestres a 20 ° C. </li><li> La transferencia de un número adecuado de adultos el día 1 en la placa de DEG para iniciar la restricción dietética. </li><li> Para un análisis de ciclo de vida, creó un total de 6-8 con placas 10-20 gusanos por placa para cada condición de DEG. </li><li> Puntuación de la viabilidad de cada gusano cada 2 días hasta que todos los gusanos han muerto. Es fundamental que los gusanos se transfirieron a placas de DEG fresca cada 12-48 horas para evitar la privación completa de alimentos. </li></ol> 4. Los resultados representativos: Se muestra en la Figura 1 es un gráfico de una curva de calibración representante para la estimación de la concentración OP50 en relación con OD 600. La ecuación generada por el análisis de línea de regresión puede utilizarse para todos los cálculos futuros de OP50 concentraciones de bacterias. Muestra en la Figura 2 es un ejemplo de la determinación del efecto de los tratamientos crónicos en DEG significa vida útil de las cepas de gusanos diferentes. La línea azul representa una normal dependiente de la dosis respuesta de tipo salvaje gusanos de DEG. La línea roja indica que el efecto de la vida útil de DEG es parcialmente suprimida por la RRD-2 oe, mientras que el daf-16 (mu86) no tiene ningún efecto sobre la SDR-inducida por prolongación de la vida. Información sobre métodos para realizar análisis de ciclo de vida de C. elegans se describe en la literatura previa 1-3. <img src="/files/ftp_upload/2701/2701fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Representante resultado de una curva de calibración para la estimación de la E. Coli OP50 concentración. OP50 concentración se representa como una función de medida OD 600 valores. Las barras de error = SD cultivo bacteriano noche a la mañana se diluyó 1.5x, 2x, 4x, 8x, 16x, 32x antes de la medición de absorbancia, y posteriormente diluido 1.000 x dos veces antes de la medición ufc. <img src="/files/ftp_upload/2701/2701fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Representante resultado de una C. elegans experimento esperanza de vida comparando los animales salvajes N2 tipo (azul) con dos diferentes mutantes (verde y rojo) en respuesta a los DEG (la figura de Ching et al. 4). Las barras de error = SEM

<ol><li>Hsu, A. L., Murphy, C. T., Kenyon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+aging+and+age-related+disease+by+DAF-16+and+heat-shock+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Regulation of aging and age-related disease by DAF-16 and heat-shock factor.</a> Science. 300, 1142-1145 (2003).</li>
<li>Kenyon, C., Chang, J., Gensch, E., Rudner, A., Tabtiang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+C.+elegans+mutant+that+lives+twice+as+long+as+wild+type%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A C. elegans mutant that lives twice as long as wild type.</a> Nature. 366, 461-464 (1993).</li>
<li>Apfeld, J., Kenyon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+lifespan+by+sensory+perception+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Regulation of lifespan by sensory perception in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 402, 804-809 (1999).</li>
<li>Ching, T. T., Paal, A. B., Mehta, A., Zhong, L., Hsu, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((drr-2+encodes+an+eIF4H+that+acts+downstream+of+TOR+in+diet-restriction-induced+longevity+of+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">drr-2 encodes an eIF4H that acts downstream of TOR in diet-restriction-induced longevity of C. elegans.</a> Aging Cell. 9, 545-557 (2010).</li>
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<li>Masoro, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subfield+history%3A+caloric+restriction%2C+slowing+aging%2C+and+extending+life%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Aging+Knowledge+Environ%22%5BJournal%5D)">Subfield history: caloric restriction, slowing aging, and extending life.</a> Sci Aging Knowledge Environ. , RE2-RE2 (2003).</li>
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<li>Houthoofd, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axenic+growth+up-regulates+mass-specific+metabolic+rate%2C+stress+resistance%2C+and+extends+life+span+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Axenic growth up-regulates mass-specific metabolic rate, stress resistance, and extends life span in Caenorhabditis elegans.</a> Exp Gerontol. 37, 1371-1378 (2002).</li>
<li>Houthoofd, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((No+reduction+of+metabolic+rate+in+food+restricted+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">No reduction of metabolic rate in food restricted Caenorhabditis elegans.</a> Exp Gerontol. 37, 1359-1369 (2002).</li>
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<li>Panowski, S. H., Wolff, S., Aguilaniu, H., Durieux, J., Dillin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PHA-4%2FFoxa+mediates+diet-restriction-induced+longevity+of+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">PHA-4/Foxa mediates diet-restriction-induced longevity of C. elegans.</a> Nature. 447, 550-555 (2007).</li>
<li>Lakowski, B., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+caloric+restriction+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The genetics of caloric restriction in Caenorhabditis elegans.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 13091-13096 (1998).</li>
<li>Kaeberlein, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifespan+extension+in+Caenorhabditis+elegans+by+complete+removal+of+food%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Lifespan extension in Caenorhabditis elegans by complete removal of food.</a> Aging Cell. 5, 487-494 (2006).</li>
<li>Greer, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+AMPK-FOXO+pathway+mediates+longevity+induced+by+a+novel+method+of+dietary+restriction+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">An AMPK-FOXO pathway mediates longevity induced by a novel method of dietary restriction in C. elegans.</a> Curr Biol. 17, 1646-1656 (2007).</li>
</ol>

La restricción dietética (DR) se sabe que aumenta la vida útil y retrasar la aparición de diversas enfermedades relacionadas con la edad en una amplia gama de especies, incluyendo mamíferos 7.5. Manipulaciones ambientales y genéticos se han utilizado para el modelo DR en C. elegans, incluidos los gusanos de cultivo en un medio líquido semi-definido 8,9, la dilución de la fuente de alimento de bacterias en un medio líquido 10 a 12, y el uso de mutantes de comportamiento que se al...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Carbenicilina </td><td> Duchefa Biochemie </td><td> C0109.25 </td><td> Disuelto en el agua. </td></tr><tr><td> Kanamicina </td><td> Roche </td><td> 10106801001 </td><td> Disuelto en el agua. </td></tr><tr><td> Bacto-peptona </td><td> Becton, Dickinson and Company </td><td> DF0118072 </td><td></td></tr><tr><td> Bacto-triptona </td><td> Becton, Dickinson and Company </td><td> DF0123075 </td><td></td></tr><tr><td> Bacto-extracto de levadura </td><td> Becton, Dickinson and Company </td><td> DF0127071 </td><td></td></tr><tr><td> Agar </td><td> Becton, Dickinson and Company </td><td> DF00145170 </td><td></td></tr><tr><td> Tubo de cultivo estéril </td><td> EE.UU. Científico </td><td> 1485-0810 </td><td></td></tr><tr><td> Espectrofotómetro </td><td> Amersham Biosciences </td><td> Gene Quant pro </td><td> Amersham ahora es parte de GE Healthcare. </td></tr><tr><td> Microscopio de disección </td><td> Zeiss </td><td> Stemi 2000 </td><td></td></tr><tr><td> Centrífugo </td><td> Beckman Coulter </td><td> Accuspin FR </td><td></td></tr></tbody></table>

placa sólida basado en la restricción dietética caenorhabditis elegans</em

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Reducción de la ingesta de alimentos sin desnutrición o inanición se sabe que aumenta la vida útil y retrasar la aparición de diversas enfermedades relacionadas con la edad en una amplia gama de especies, incluyendo mamíferos. También provoca una disminución en el peso corporal y la fertilidad, así como niveles más bajos de glucosa en plasma, la insulina y el IGF-1 en estos animales. Este tratamiento se refiere a menudo como la restricción dietética (DR) o la restricción calórica (CR). El nematodo Caenorhabditis elegans se ha convertido en un importante organismo modelo para estudiar la biología del envejecimiento. Manipulaciones ambientales y genéticos se han utilizado para el modelo DR y han demostrado prolongar la vida de C. elegans. Sin embargo, muchos de los estudios reportados en la República Dominicana C. elegans se realizaron mediante la propagación de los animales en un medio líquido, mientras que la mayoría de los estudios de genética en el campo del envejecimiento se realiza en el estándar de agar sólido en placas de Petri. Aquí se presenta un protocolo estándar de DR con NGM agar sólido basado en la placa con bacterias muertas.

Aquí se presenta un protocolo para la realización de placa sólida basada en la restricción dietética en<em&gt; C. elegans</em&gt; Con bacterias muertas.

Placa Sólida basado en la restricción dietética Caenorhabditis elegans</em

Se sabe que la reducción de la ingesta de alimentos sin malnutrición ni inanición aumenta la esperanza de vida y retrasa la aparición de diversas enfermedades relacionadas con la edad en una amplia...

El procedimiento realiza una restricción dietética en la placa estándar basada en agar en *C. elegans* para estudiar su efecto sobre la longevidad, la reproducción y el metabolismo. Esto se logra primero midiendo con precisión la concentración de las bacterias que se utilizarán como fuente alimenticia. El segundo paso del procedimiento consiste en diluir adecuadamente la cultura bacteriana hasta concentraciones adecuadas.Luego prepare placas SDR con bacterias muertas. Finalmente, establezca experimentos SDR con una población de gusanos sincronizada por edad. Los resultados de la medición de la producción de descendencia y la longevidad pueden mostrar una producción de descendencia retrasada y reducida, así como un aumento en la longevidad media.La principal ventaja de esta técnica frente a otros 60 métodos como Dian en medio AZA, es que todo el experimento se realizará en un medio sólido estándar basado en AGA que es utilizado por la mayoría de los laboratorios de organismos de sangre caliente para experimentos de restricción dietética, y se deben establecer curvas de calibración separadas para cada cepa bacteriana utilizada como fuente alimenticia. Seleccione una colonia individual de la bacteria e coli OP 50 a partir de una siembra reciente en agar lb e inocule tres mililitros de cultivo líquido de caldo lb en un agitador a 37 grados Celsius durante la noche. Prepare diluciones seriadas al doble de la cultura nocturna.Luego, mida la absorbancia de cada dilución a 600 nanómetros mediante espectrofotómetro, en tres réplicas. Diluya aún más cada suspensión bacteriana, un millón de veces, y siembre uniformemente 0,4 mililitros de la suspensión bacteriana de cada dilución en una placa de agar LB de 100 milímetros e incube a 37 grados Celsius durante 18 a 24 horas. Cuente el número de colonias bacterianas desarrolladas en cada placa para calcular las unidades formadoras de colonias por mililitro para cada muestra.Ahora represente gráficamente la DO 600 en función de la concentración bacteriana y realice un análisis de regresión lineal para establecer la relación entre los valores medidos de DO 600 y las concentraciones bacterianas de OP 50. Para este método, se utiliza una concentración bacteriana de 1 × 10¹¹ UFC/mL en la condición de alimentación ad libitum y de 1 × 10⁸ UFC/mL como condición óptima de alimentación con restricción dietaria. Sin embargo, pueden ser necesarias cuatro a seis concentraciones bacterianas diferentes para establecer una relación completa dependiente de la dosis.Para SDR y sus respuestas. Prepare un inóculo con una colonia individual de bacterias e coli OP 50 en tres mililitros de caldo LB líquido, cultivados en un agitador a 37 grados Celsius durante seis a ocho horas. Transfiera el cultivo de OP 50 a un matraz nuevo que contenga 500 mililitros de caldo LB y cultive durante la noche para que las bacterias alcancen la saturación, si es necesario.Prepare la dilución adecuada del cultivo OP 50 para la medición de la absorbancia a OD 600. Para determinar la concentración de bacterias, haga un pellet de las bacterias mediante centrifugación a 1500 Gs durante 20 minutos. Retire el sobrenadante y resuspenda las bacterias a una concentración de 1 × 10¹² UFC por mililitro.Ahora, prepare cultivos bacterianos de 10 mililitros en seis concentraciones diferentes, que varían desde 1 × 10¹² hasta 1 × 10⁷ UFC por mililitro. Pipete 0,2 mililitros del cultivo bacteriano en el centro de una placa N GM solidificada de 60 milímetros. Evite tocar la superficie de la placa con la punta de la pipeta, ya que los arañazos en la superficie permiten que los gusanos se entierren en los agarres.Coloque las placas en un incubador a 37 grados Celsius durante una hora. Luego, aplique 10 microlitros de carbonic soin al 100 miligramos por mililitro y 10 microlitros de can micina al 50 miligramos por mililitro a cada placa para detener el crecimiento de las bacterias. Almacene las placas con diferentes concentraciones de antibiótico que mataron bacterias a cuatro grados Celsius para su uso futuro durante un período de hasta un mes.Es importante preparar y almacenar suficientes placas, preferiblemente del mismo lote para toda la planta. Realice el experimento al menos uno o dos días antes para verificar la viabilidad de las bacterias. Raspe algunas bacterias de las placas SDR y extiéndalas sobre una placa N GM vacía con carbónico, sein y antimicina.Coloque la placa en un incubador a 37 grados Celsius durante seis a ocho horas y confirme la ausencia de crecimiento bacteriano. Para la mayoría de los estudios relacionados con SDR, como el análisis de longevidad y el perfilado de la producción de descendencia, es esencial la preparación de una población de gusanos sincronizada por edad. Utilice un recolector de gusanos de platino para transferir de 20 a 30 adultos reproductivamente activos a varias placas NGM regulares.Con OP 50. Dependiendo del número de huevos necesarios para los experimentos, puede que se requieran más adultos. Deje las placas a 20 grados Celsius durante cuatro horas para permitir la puesta de huevos.Retire los adultos de la placa e inspeccione visualmente las placas en busca de huevos. Continúe incubando las placas a 20 grados Celsius para permitir que la descendencia se desarrolle hasta la etapa de adulto del día uno tardío L4. Por lo general, esto tarda tres días para gusanos silvestres N2 a 20 grados Celsius.Para el análisis de longevidad. Transfiera 10 a 12 gusanos adultos del día uno a una placa SDR para iniciar la restricción dietética. Para obtener suficiente potencia estadística, utilice un total de 60 a 100 gusanos para cada condición de SDR.Puntúe la viabilidad de cada gusano cada dos o tres días hasta que todos los gusanos hayan muerto. Es importante transferir los gusanos a placas SDR frescas cada dos días para evitar el ayuno. Esta curva de calibración representa la concentración de OP 50 en relación con la DO 600.La ecuación generada por el análisis de regresión lineal puede utilizarse para todos los cálculos futuros de concentraciones bacterianas de OP 50. Este estudio analiza el efecto de tratamientos crónicos con SDR sobre la longevidad media de diferentes cepas de gusanos en comparación con la respuesta dependiente de la dosis normal de gusanos de tipo salvaje frente a SDR. El efecto de SDR sobre la longevidad es parcialmente suprimido por la sobreexpresión de DR dos, mientras que la mutación DAF 16 MU 86 no tiene efecto sobre la extensión de la longevidad inducida por SDR.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo realizar Dian en la partida estándar de AGA basada en la elegancia marina.

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El siguiente protocolo describe el desarrollo y la optimización de un flujo de trabajo de alto rendimiento para el cultivo de gusanos, imágenes de fluorescencia y procesamiento automatizado de imágenes para cuantificar los agregados de poliglutamina como una evaluación de los cambios en la proteostasis.

Automatización de la cuantificación agregada en Caenorhabditis elegans

Este es un método comúnmente utilizado para la disección de gónadas de C. elegans seguida de grieta por congelación, que produce muestras de línea germinal para inmunofluorescencia a través de tinción de anticuerpos, o para tinción DAPI simple para visualizar el ADN. Este protocolo ha sido exitoso para los estudiantes universitarios en un laboratorio de investigación y en una experiencia de investigación de pregrado basada en cursos.

C. elegans Disección de gónadas y grieta por congelación para inmunofluorescencia y tinción DAPI

Este protocolo describe un ensayo para cuantificar la tasa de alimentación de Caenorhabditis elegans basado en la medición del aclaramiento de bacterias en cultivo líquido.

Cuantificación de la ingesta de alimentos en Caenorhabditis elegans mediante la medición del aclaramiento bacteriano

Aprende a realizar restricción dietética en placas sólidas con Caenorhabditis elegans usando bacterias inactivadas. Este protocolo permite estudiar los efectos sobre longevidad, reproducción y metabolismo en este organismo modelo.

Placa Sólida basado en la restricción dietética Caenorhabditis elegans

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