Name: Ratón completo modelo de estasis Inferior Vena Cava trombosis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 34 s
Description: Aprende el modelo de estasis completa en ratón para estudiar la trombosis de la vena cava inferior y la inflamación vascular. Este método permite cuantificar el trombo y evaluar la progresión de la respuesta inflamatoria aguda a crónica.

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1. Procedimientos de ratón anestesia <ol><li> Los animales son extraídas de su jaula y se colocan en una cámara de inducción de la anestesia antes de la operación para la inducción de gas en isoflurano 5% y el 100% de oxígeno, con un caudal de 0,5 litros por minuto (vaporizador controlada). </li><li> Los ratones son sedados en la cámara de inducción de la anestesia, se retiran de la cámara y la parte ventral del abdomen se afeita con una maquinilla eléctrica, o mantenerse dentro de la cámara si es una crema depilatoria el cabello se utiliza (1 minuto). </li><li> Si bien todavía bajo sedación, se pesan, los ojos están lubricados con un ungüento oftálmico estéril y se coloca en un recumbancy dorsal en un agua caliente que circula dispositivo de calentamiento bajo anestesia general, con un cono de la nariz, con isoflurano y oxígeno. En este punto, la tasa de oxígeno se reduce a 0,2 litros por minuto. </li><li> El abdomen se rocía con una solución de clorhexidina (diacetato de clorhexidina es rápidamente bacterialcidal y persistente) y se limpió con una gasa estéril tres veces o hasta que el sitio quirúrgico está limpio. </li></ol> 2. Ratón Micro-quirúrgicos y procedimientos de recuperación <ol><li> Una incisión de línea media ventral (2 cm) se realiza con unas tijeras iris a través de la piel y la pared abdominal exponer el abdomen. Una solución salina estéril gasa empapada 2x2in se utiliza para reflejar los intestinos al lado izquierdo del animal. Una inmovilización del ratón se pone en la visualización lugar en que se de la vena cava inferior (VCI). </li><li> En este punto, un nivel de mantenimiento del 2% isoflurance y 100% de oxígeno de 0,2 litros / min se utiliza para el resto de la intervención quirúrgica. </li><li> Disección roma se facilita con un hisopo aplicador estéril y extra pinzas delicadas medio del iris curva de tejidos. Se debe tener cuidado en la manipulación de los tejidos del ratón para que son extremadamente frágiles. Al entrar en la cavidad abdominal, utilice una gasa estéril salina 4x4in empapado de reflejar y exteriorizar el intestino en un campo estéril, lo que permite la visualización de la vena cava inferior. </li><li> Todas las ramas de nuevo IVC, a partir de las venas renales hasta la bifurcación ilíaca, se cauterizan, mientras que las ramas laterales se ligan con sutura de prolene 7-0 no reactivo. </li><li> El IVC está separada de la aorta, inmediatamente por debajo de las venas renales. 7-0 prolene se utiliza para ligar la vena cava inferior. </li><li> El sitio de la laparotomía se cierra en forma de dos capas. Nuestro laboratorio utiliza Vicryl 5-0, una sutura sintética, en un patrón continuo para cerrar la pared abdominal. Pegamento pegamento de la piel se utiliza para cerrar la piel. No hay puntos de sutura externos para su eliminación. </li><li> Ratones después se recuperan en una jaula de ratón individual, observada después de la operación (45 minutos a 2 horas), bajo una lámpara de calentamiento (distancia mínima de 24 centímetros de distancia de la jaula), y luego regresaron a sus viviendas originales. Medicamentos para el dolor y agentes anti-inflamatorios no se puede utilizar si no interfiere con el objetivo de este estudio. Justificación científica para suspender medicamentos para el dolor, veterinarios, y la aprobación ICUCA se necesitan. Nuestro laboratorio ha descubierto que la buprenorfina, 0,05-0,1 mg / kg vía subcutánea es un analgésico excelente pre-y post-operatorios para los ratones. Además, la lidocaína en 4mg/kg (0,4 ml / kg de una solución al 1%) puede ser infundida en el sitio de la incisión, cuando analgésicos sistémicos pueden confundir los resultados experimentales. </li><li> Animales Sham de cada grupo experimental someterse a la disección más, utilizados para el abordaje quirúrgico, con excepción de la vena cava inferior o las ramas de drenaje no se ligan o cauterizan. </li><li> La eutanasia se realiza de acuerdo con las recomendaciones establecidas por la directrices de la American Veterinary Medical Association sobre la eutanasia para los roedores. </li></ol>

<ol><li>Naess, I. A., Christiansen, S. C., Romundstad, P., Cannegieter, S. C., Rosendaal, F. R., Hammerstrom, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+mortality+of+venous+thrombosis%3A+a+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study.</a> J Thromb Haemost. 5, 692-699 (2007).</li>
<li>White, R. H., Keenan, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+race+and+ethnicity+on+the+incidence+of+venous+thromboembolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of race and ethnicity on the incidence of venous thromboembolism.</a> Thromb Res. 123, Suppl 4. S11-S17 (2009).</li>
<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 370-372 (2008).</li>
<li>Henke, P. K., Varga, A., De, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deep+vein+thrombosis+resolution+is+modulated+by+monocyte+CXCR2-mediated+activity+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Deep vein thrombosis resolution is modulated by monocyte CXCR2-mediated activity in a mouse model.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 1130-1137 (2004).</li>
<li>McDonald, A. P., Meier, T. R., Hawley, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+is+associated+with+impaired+thrombus+resolution+in+a+mouse+model+of+stasis+induced+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Aging is associated with impaired thrombus resolution in a mouse model of stasis induced thrombosis.</a> Thromb Res. 125, 72-78 (2010).</li>
<li>Myers, D., Farris, D., Hawley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectins+influence+thrombosis+in+a+mouse+model+of+experimental+deep+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis.</a> J Surg Res. 108, 212-221 (2002).</li>
<li>Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-selectin+and+leukocyte+microparticles+are+associated+with+venous+thrombogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis.</a> J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).</li>
<li>Myers, D. D. J. r, Rectenwald, J. E., Bedard, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+venous+thrombosis+with+an+oral+inhibitor+of+P+selectin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Decreased venous thrombosis with an oral inhibitor of P selectin.</a> J Vasc Surg. 42, 329-336 (2005).</li>
</ol>

El modelo de ratón completa estasis de la vena cava inferior trombosis Cava se puede realizar en múltiples cepas de ratones de diferentes edades. El modelo más adaptado a los ratones de al menos 20 gramos de peso. Este modelo animal de trombosis venosa permite a los investigadores para estudiar las interacciones entre inflamatoria en la pared venosa y la trombosis venosa oclusiva. Desde nuestra experiencia, hemos encontrado que más de 10 animales por grupo son necesarios para obtener la significación estadística entre l...

<table border="1"><tbody><tr><td> Suministros y Equipos </td></tr><tr><td> Gas isoflurano </td></tr><tr><td> Prolene 7-0 sutura </td></tr><tr><td> Vicryl 5-0 sutura </td></tr><tr><td> La piel de cola </td></tr><tr><td> Ojo de lubricación </td></tr><tr><td> Nolvasan solución o la solución bacteriostática </td></tr><tr><td> Estereomicroscopio alcance </td></tr><tr><td> MediCapture </td></tr><tr><td> Los aplicadores de algodón </td></tr><tr><td> Gasa 2x2 </td></tr><tr><td> Almohadilla eléctrica </td></tr><tr><td> Anestesia de la máquina </td></tr><tr><td> Cuentas de vidrio instrumento esterilizador </td></tr><tr><td> Micro instrumentos quirúrgicos </td></tr><tr><td> Inmovilizadores abdominal </td></tr></tbody></table>

ratón completo modelo de estasis inferior vena cava trombosis

Mouse Complete Stasis Model of Inferior Vena Cava Thrombosis

El tromboembolismo venoso (TEV), incluye la trombosis venosa profunda (TVP) y embolismo pulmonar (EP). En los Estados Unidos (EE.UU.), la morbilidad y mortalidad elevadas tasas de TEV hacer un serio problema de salud 1.2. Después de la enfermedad cardíaca y accidente cerebrovascular, tromboembolismo venoso es la tercera enfermedad vascular tres más comunes. Sólo en los EE.UU., hay unas 900.000 personas sufren cada año, con 300.000 muertes anuales 3. Un confiable en un modelo animal in vivo para estudiar los mecanismos de esta enfermedad es necesario. Las ventajas de utilizar el modelo de ratón completa estasis de la vena cava inferior trombosis cava son varias. El modelo de ratón permite la administración de volúmenes muy pequeños de la limitada disponibilidad de los agentes de la prueba, lo que reduce drásticamente los costes. Más prometedora es la posibilidad de que los ratones con knock-outs genéticos que permiten a funciones específicas de los factores inflamatorios y de coagulación para ser delineadas. Actuales técnicas moleculares permiten la cuantificación de la pared de la vena, la sangre de trombos, todo, y el plasma para los ensayos. Sin embargo, una preocupación importante participación de este modelo es el tamaño de las limitaciones operativas y la friabilidad de los vasos. Además, debido al peso de la muestra pequeños IVC (media de 0.005 gramos) es necesario aumentar el número de animales para el análisis estadístico preciso para los tejidos, trombosis, y los ensayos de la sangre, como la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR), western blot, ligado a enzimas (ELISA), zymography, la pared venosa y el análisis celular de trombos, y la sangre entera y plasma de los ensayos 4-8. La principal desventaja con el modelo de estancamiento es que la falta de flujo sanguíneo inhibe el efecto máximo de agentes terapéuticos administrados sistémica en el trombo y la pared de la vena.

El modelo de ratón completa estasis de la vena cava inferior trombosis cava produce cantidades cuantificables de los tejidos de la pared venosa y trombosis. Que ha demostrado ser útil para evaluar las interacciones entre la pared de la vena y el trombo oclusivo y en la evaluación de la progresión de la aguda a la inflamación crónica.

Ratón completo modelo de estasis Inferior Vena Cava trombosis

El tromboembolismo venoso (TEV) incluye tanto la trombosis venosa profunda (TVP) como la embolia pulmonar (EP). En los Estados Unidos (EE. UU.), la elevada morbilidad y...

El objetivo general de este procedimiento es ligar la VCI, provocando una estasis completa que resulte en un trombo para estudiar la trombogénesis y su resolución. Esto se logra primero exponiendo la VCI mediante una incisión media ventral. A continuación, se localizan todos los afluentes dorsales y laterales y se cauterizan o ligan. Luego, la vena cava inferior se separa de la aorta por debajo de las venas renales y se liga. Finalmente, se extraen la vena cava inferior y el trombo en diferentes momentos para evaluación molecular. En última instancia, se pueden obtener resultados que mostraron el grado de carga trombótica hasta el día seis.El modelo murino de ligadura de la vena cava inferior fue desarrollado en nuestro laboratorio para estudiar ratones con genes eliminados. La demostración visual de este modelo quirúrgico es fundamental, ya que los pasos del procedimiento son difíciles de aprender debido a las técnicas microquirúrgicas necesarias para llevar a cabo este protocolo. Para comenzar, anestesie al animal en una cámara de inducción anestésica preoperatoria con 5% de isoflurano y 100% de oxígeno a una velocidad de 0,5 litros por minuto.Saque al animal de la cámara, sostenga al animal boca arriba y afeite el abdomen ventral con una maquinilla eléctrica. A continuación, pese al animal. Luego, lubrique los ojos con una pomada oftálmica estéril.Coloque el animal en posición supina sobre una almohadilla térmica con agua caliente bajo anestesia general con isoflurano y oxígeno. Rocíe el abdomen con solución de clorhexidina y limpie con gasa estéril. Desinfecte el abdomen hasta que el sitio quirúrgico esté limpio para comenzar la cirugía.Con tijeras de iris, realice una incisión media ventral a través de la piel y la pared abdominal, exponiendo el abdomen con gasa estéril empapada en solución salina. Desvíe los intestinos del animal hacia su lado izquierdo. Utilice un sujetador para ratón para exponer la vena cava inferior (IVC) o la vena cava anterior (CVA).A partir de este paso y durante el resto de la cirugía, mantenga la anestesia con 2% isoflurano, 100% oxígeno a una velocidad de 0,2 litros por minuto. Utilizando un hisopo estéril de algodón y pinzas de tejido para iris extra delgadas, realice una disección roma de la fascia abdominal para exponer la vena cava inferior y todos sus ramas.Primero cauterice todas las ramas posteriores de la vena cava inferior desde las venas renales hasta la bifurcación ilíaca. Luego ligue las ramas laterales con siete suturas de prolina no reactivas de calibre 7-0. Separe la vena cava inferior de la aorta justo inferior a las venas renales.Utilice suturas de prolina siete-oh para ligar la vena cava inferior. Cierre la pared abdominal utilizando suturas sintéticas de Vicryl cinco-oh. Luego, aplique cola adhesiva para piel para cerrar la piel.Monitoree al animal en una jaula de recuperación bajo una lámpara de calor, luego devuelva al animal a su unidad de alojamiento original. Este análisis compara ratones control y animales que han sido sometidos a ligadura de la VCI y trombosis en el momento de la eutanasia. En el día dos o en el día seis, se retiró y pesó el trombo de la VCI junto con la pared venosa asociada.La medición del peso del trombo permite al investigador documentar el grado de trombosis y su grado de resolución a lo largo del tiempo. Es un indicador del evento inflamatorio asociado con la activación de las células endoteliales. La medición también es una indicación útil de la eficacia de un agente terapéutico para reducir la inflamación y la cantidad de trombo en la pared venosa. Aquí, la vena cava inferior junto con la aorta fue extraída.Sección incrustada en parafina cortada sobre portaobjetos y teñida con hematina y eosina. Este gráfico representa el número de células polimorfonucleares o PMN en tejidos de ratones control frente a ratones experimentales. La medición de las poblaciones de células inflamatorias en la pared venosa se utiliza para documentar la respuesta inflamatoria natural aguda a crónica en la pared venosa con trombos venosos presentes en un animal normal; una respuesta inflamatoria aguda al segundo día debe ser predominantemente de neutrófilos.Como se indica en esta figura, si no hay infección presente, la población de neutrófilos en la pared venosa debería disminuir después del día dos. En nuestro modelo de ratón de trombosis venosa. Aquí, se compara el número de monocitos en la pared venosa.Se observarán aumentos en una respuesta inflamatoria de la pared venosa más subaguda y crónica. En las poblaciones de monocitos de la pared venosa, los monocitos secretan enzimas proteolíticas, que se ha demostrado que promueven la resolución natural del trombo venoso. Con el tiempo, si no está presente una infección, a partir de este video ahora debería tener una buena comprensión de cómo realizar nuestro modelo de ligadura de la vena cava inferior.Este modelo es excelente para estudiar la trombogénesis y la resolución del trombo a lo largo del tiempo.

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Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

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Aprende el modelo de estasis completa en ratón para estudiar la trombosis de la vena cava inferior y la inflamación vascular. Este método permite cuantificar el trombo y evaluar la progresión de la respuesta inflamatoria aguda a crónica.

Ratón completo modelo de estasis Inferior Vena Cava trombosis

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