La ligadura cecal punción

Hola, mi nombre es Miguel Toscano, del laboratorio de la Dra. Dena en el departamento de Microbiología y Hematología de la Universidad Temple. Hoy les mostraremos cómo establecer el modelo de infección y punción del iCal en la cepa de ratón C57 Black 6. Utilizamos este modelo en nuestro laboratorio para simular la sepsis humana.

Básicamente, este modelo consiste en una punción del ciego que permite la liberación de material fecal hacia la cavidad peritoneal para producir una sepsis polimicrobiana, generando así una respuesta inmunitaria exacerbada. En este modelo, muchos órganos y diferentes tipos de células sufren daños irreversibles, lo que al final puede provocar la muerte del animal.

Así que comencemos. Anestesiar al ratón. El primer paso consiste en anestesiar al animal mediante una inyección intraperitoneal.

Una mezcla, uno a uno, de Ketomine y xilacina. Para evitar que el ratón muerda y para no lastimarlo, debemos tomar al ratón por la cola con una mano. Con la otra mano, presionamos la espalda contra el suelo.

Luego podemos tomar al ratón por la parte posterior de la cabeza y girar al animal sobre su espalda para exponer el abdomen. Con una jeringa de insulina de calibre 29, inyectamos entre 20 y 30 microlitros de anestesia en la cavidad peritoneal. Para preparar al ratón para el procedimiento, agarre la parte posterior del ratón y rasúrele el abdomen presionando la cola o la pata del ratón.

Verificamos que el ratón no sea sensible al dolor. Luego, se desinfecta el abdomen. Primero frotando con solución de Betadine, seguido de la limpieza con una toallita de alcohol isopropílico durante al menos un minuto. Para practicar la laparotomía, levantamos la piel en la parte media del abdomen con la pinza y realizamos una pequeña incisión de aproximadamente un centímetro de longitud.

Luego levante el perineo y practique otra pequeña incisión para exponer la cavidad peritoneal. Con pinzas curvas, sostenga la membrana peritoneal. Identifique y exponga el ciego pasándolo a través de la membrana peritoneal.

Colóquelo sobre el abdomen. Ahora es el momento de la ligadura. Este es un factor importante.

Para determinar la gravedad del modelo, podemos modular la severidad del procedimiento. Dependiendo de la extensión de la ligadura, los ratones desarrollarán una sepsis más leve. Si la ligadura se realiza más cerca del extremo del ciego, una sepsis de grado moderado si se hace en la mitad y una sepsis grave si se realiza más cerca de la válvula ileocecal, la severidad del procedimiento se reflejará en el porcentaje de mortalidad.

Nunca ligue la válvula ileocecal. Realice ahora la ligadura utilizando sutura de seda con un nudo doble para asegurarla bien, realizando la punción. Sujete el ciego y realice cuidadosamente una punción cerca del sitio de ligadura, y haga otra punción más próxima al extremo del ciego. La membrana del ciego es blanda y se perforará muy fácilmente.

Utilizando agujas de diferentes grosores y realizando una o dos perforaciones, también se puede modular la gravedad del modelo. El método de punción simple o doble mostrado aquí es una técnica alternativa a la punción clásica completa. La ventaja de usar el método de punción simple o doble es que se puede controlar mejor la cantidad de heces expulsadas cuando se comprime el ciego.

Sujete el ciego con dos dedos y extruya suavemente el ciego para extraer una cantidad muy pequeña de heces. Cierre la laparotomía, luego levante el peritoneo y coloque cuidadosamente el ciego de vuelta en la cavidad peritoneal.

Tenga extremo cuidado para evitar pinchazos accidentales del ciego con la pinza; se recomienda el uso de pinzas más grandes. Ahora es el momento de cerrar la cavidad peritoneal. Utilizando sutura de seda, es muy importante asegurarse de que quede bien cerrada.

Comenzamos desde un lado de la herida donde hacemos un nudo. Continúe realizando la sutura hasta el otro lado, pasando la seda por debajo del bucle de la punción anterior. Para cerrar la piel, podemos usar clips para heridas Mitchell o clips reflex, utilizando la herramienta adecuada para cerrar los clips.

Coloque tantos clips como sean necesarios para asegurarse de que la herida esté cerrada. Reanime a los ratones inyectando subcutáneamente un mililitro de solución salina precalentada. Mediante una aguja de calibre 25, esta medida de reanimación líquida inducirá la fase hiperdinámica de la sepsis, finalizando así el procedimiento.

Coloque el ratón bajo una luz de calor infrarroja, o alternativamente sobre una almohadilla calefactora hasta que el ratón se recupere de la anestesia. Proporcione alimento y agua en el suelo de la jaula y supervise a los animales cada ocho a 12 horas en busca de signos de enfermedad. Inyecte buprenorfina por vía subcutánea para analgesia postoperatoria.

Un analgésico diferente que se puede utilizar es T.Tramadol. Los signos de sepsis, los síntomas de sepsis son fiebre, letargo, pelo erizado, erección, diarrea, agrupamiento y malestar general. Los animales muy enfermos presentan una disminución severa de la temperatura corporal y apenas se mueven para evitar sufrir.

En esta etapa deben ser sacrificados humanamente. Así es como realizamos el modelo de ligadura en forma de hoz y punción. Esperamos que hayan disfrutado la demostración de este procedimiento y que les resulte muy útil para su investigación antes de iniciar su estudio con animales. Recomendamos encarecidamente utilizar cerebros viejos o no utilizados previamente para entrenarse, con el fin de establecer el grado de severidad adecuado para sus experimentos mediante la modificación de la longitud de la ligadura, el grosor de la aguja y el número de punciones.

Dicho esto, adiós.