La ligadura cecal punción

Hola, mi nombre es Miguel Toscano y pertenezco al laboratorio del Dr. Dena en el departamento de Microbiología y Hemología de la Universidad de Temple. Hoy te vamos a mostrar cómo configurar el modelo de alegación y pinchazo de iCal en la cepa C 57 Black Seas Mouse. Utilizamos este modelo en nuestro laboratorio para imitar la sepsis humana.

Básicamente, este modelo consiste en una punción del suero que permite la liberación de material fecal en la cavidad peritoneal para producir una sepsis polimicrobiana, generando así una respuesta inmune exacerbada. En este modelo, muchos órganos y diferentes tipos de células se dañan irreversiblemente. Que al final puede provocar la muerte del animal.

Así que comencemos. Anestesiar al ratón. El primer paso es anestesiar al animal mediante inyección intraperitoneal.

Una mezcla, uno a uno de Ketomine y xilacina. Para evitar ser mordido por el ratón, para evitar lastimarlo, debemos agarrar al ratón de la cola con una mano. Con la otra mano, presionamos contra el suelo.

Luego podemos agarrar al ratón por la parte posterior de la cabeza y luego girar al animal sobre su espalda para exponer el abdomen. Con una jeringa de insulina de calibre 29, inyectamos de 20 a 30 microlitros de la anestesia en la cavidad peritoneal. Preparando el ratón para el procedimiento, agarre la parte posterior del ratón y afeitar su abdomen presionando la cola y/o la pata del ratón.

Comprobamos que el ratón no es sensible al dolor, luego se desinfecta el abdomen. Primero frotando con una solución de Betadine, seguido de una toallita con alcohol isopropílico durante al menos un minuto. Practicar la laparotomía Para practicar una laparotomía, levantamos la piel en medio del abdomen con las pinzas y hacemos una pequeña incisión de aproximadamente un centímetro de longitud.

A continuación, levante el perineo y practique otra pequeña incisión para exponer la cavidad peritoneal. Con pinzas curvas, sostenga la membrana peritoneal. Identificar y exponer el ciego pasándolo a través de la membrana peritoneal.

Colócalo sobre el abdomen. Ahora es el momento de la ligadura. Este es un factor importante.

Para determinar la severidad del modelo, podemos modular la severidad del procedimiento. Con la extensión de la ligadura, los ratones desarrollarán una sepsis más leve. Si la ligadura se realiza más cerca del final del ciego, una sepsis de grado medio si se realiza en el medio y una sepsis grave si se hace más cerca de la válvula ileocecal, la gravedad del procedimiento se reflejará en el porcentaje de mortalidad.

Nunca ligar la válvula ileocecal. Ahora haz la ligadura usando una sutura de seda con un doble nudo para que quede apretada, haciendo la punción Sostenga el ciego y con cuidado haga una punción cerca del sitio de la ligadura y haga otra punción más cerca del final del ciego. La membrana del secum es blanda y se perforará con mucha facilidad.

Utilizando agujas de diferentes grosores y realizando una o dos perforaciones, también podemos modular la gravedad del modelo. El método de punción simple o doble que se muestra aquí es una técnica alternativa a la punción clásica de secuela directa y directa. La ventaja de utilizar el método de punción simple o doble es que se puede controlar mejor la cantidad de heces extruidas cuando se busca exprimirlas.

Sostenga el secum con ambos dedos y extruya suavemente el ciego para extraer una cantidad muy pequeña de heces. Cierre de la laparotomía, A continuación, levante el peritoneo y vuelva a colocar con cuidado el ciego. En la cavidad peritoneal.

Tenga mucho cuidado para evitar pinchazos accidentales del ciego Con las pinzas, se recomienda el uso de pinzas más grandes. Ahora es el momento de cerrar la cavidad peritoneal. Utilizando sutura de seda, es muy importante que te asegures de que esté muy bien cerrada.

Comenzamos desde un lado de la herida donde hacemos un nudo. Sigue haciendo la sutura hasta el otro lado pasando la seda por debajo del lazo de la punción anterior. Para cerrar la piel, podemos utilizar pinzas para heridas Mitchell o pinzas para reflejos utilizando la herramienta adecuada para cerrar las pinzas.

Coloque tantos clips como sea necesario para asegurarse de que la herida esté cerrada. Reanimar a los ratones inyectando por vía subcutánea, un mililitro de solución salina precalentada. Utilizando una aguja de calibre 25, esta medida de reanimación con líquidos inducirá la fase hiperdinámica de la sepsis, finalizando el procedimiento.

Coloque el ratón bajo una luz calefactora infrarroja o, alternativamente, sobre una almohadilla térmica hasta que el ratón se recupere de la anestesia. Proporcione comida y agua en el suelo de la jaula y supervise a los animales cada ocho a 12 horas para detectar signos de enfermedad. Inyecte buprenorfina por vía subcutánea para la analgesia postoperatoria.

Un analgésico diferente a usar es el T.Tramadol. Signos de sepsis, los síntomas de sepsis son fiebre, letargo, pelo, erección, diarrea, acurrucamiento y malestar general. Los animales muy enfermos muestran una disminución severa de la temperatura corporal y apenas se mueven para evitar sufrir.

Deben ser sacrificados en esta etapa H.So así es como realizamos la ligadura de hoz y el modelo puntual. Con suerte, ha disfrutado de la demostración de este procedimiento y lo ha encontrado muy útil para su investigación antes de comenzar su estudio con animales. Le recomendamos encarecidamente que utilice mentes viejas o no utilizadas para el entrenamiento con el fin de establecer el grado adecuado de gravedad para sus experimentos modificando la longitud de la ligadura, el grosor de la aguja y el número de punciones.

Dicho esto, adiós.