JoVE Encyclopedia of Experiments
Investigación sobre el cáncer
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Para preparar secciones delgadas de un riñón de ratón, primero, obtenga un riñón de ratón recién cosechado. Transfiera el riñón a un papel de filtro y séquelo para garantizar una adhesión óptima al portamuestras de vibratomo.
A continuación, monte el riñón, con el uréter hacia abajo, utilizando una fina capa de pegamento de cianoacrilato aplicado a la base del portamuestras de vibratomo, asegurando el riñón en posición vertical. Transfiera el portamuestras a una bandeja tampón.
Llene la bandeja con un tampón adecuado para sumergir completamente la superficie superior del riñón. Un baño de hielo rodea la bandeja para evitar daños en los tejidos por la acumulación de calor durante el corte. Ajuste la hoja de vibratomo en un ángulo, velocidad y amplitud adecuados. Ajuste el parámetro de grosor para obtener secciones de tejido del grosor deseado.
Durante el funcionamiento, la cuchilla vibra lateralmente y avanza, penetrando a través de la muestra de tejido. La cuchilla vibratoria permite el corte con menos presión y minimiza la deformación del tejido, generando secciones uniformes de tejido renal de interés manteniendo la morfología del tejido.
Mientras tanto, ensamble una placa de pocillos múltiples que contenga una solución tampón refrigerada adecuada para imitar las condiciones fisiológicas del tejido. Ahora, transfiera las secciones de tejido cortadas al tampón. Finalmente, almacene las secciones de tejido a baja temperatura hasta un análisis posterior.
Use fórceps de punta roma para agarrar y extraer suavemente el riñón preparado de la solución de KRB helada. Coloque inmediatamente el riñón sobre papel absorbente durante aproximadamente 2 a 4 segundos para eliminar el exceso de humedad externa. Enrolle suavemente el riñón sobre el papel absorbente para asegurarse de que todos los lados del parénquima se hayan secado para que haya una adhesión óptima del riñón a la etapa de vibratomo.
Aplique inmediatamente una capa delgada de pegamento de cianoacrilato a la base de la placa de muestra de vibratomo y use pinzas de punta roma para colocar el riñón, con el uréter hacia abajo, en el área cubierta de pegamento. Aplique suavemente presión hacia abajo en la parte superior del riñón con el borde plano de las pinzas durante aproximadamente 10 a 20 segundos para secar el pegamento.
Asegure firmemente la placa de muestra a la parte inferior de la bandeja tampón y ajuste el nivel de solución KRB para que la parte superior del riñón quede completamente sumergida. Para la sección automática de vibratomo, seleccione las posiciones inicial y final del ciclo de corte de la cuchilla de vibratomo, de 0,5 a 1 centímetro de distancia del riñón, para asegurarse de que se secciona todo el plano renal.
Inicie el proceso de corte automático, asegurándose de que la cuchilla haga contacto con el riñón. Con fórceps, recolecte las secciones que se liberan del riñón y transfiéralas inmediatamente a pozos individuales.