Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:32 min. • April 30th, 2023
Para la generación de un carcinoma de células uroteliales derivado de un paciente o un modelo de ratón UCC, un ratón inmunocomprometido se inocula con células UCC humanas para estudiar la progresión del cáncer y la metástasis.
Para comenzar el xenoinjerto, tome un ratón hembra anestesiado inmunocomprometido. Afeitar la parte inferior de la espalda del ratón para exponer su región pélvica. Ahora, coloque el ratón en posición supina con su piel expuesta en contacto con una almohadilla dispersiva que sirve como electrodo de conexión a tierra para completar el circuito durante la estimulación eléctrica.
A continuación, tome un angiocatéter, un tubo delgado y hueco, conectado a una guía. Lubrique la superficie del catéter e insértelo en la uretra del ratón para acceder a su vejiga. Coloque un electrodo activo en la guía para estimular la pared de la vejiga. Este procedimiento ayuda a romper la capa de mucopolisacáridos, una barrera protectora de la mucosa de la vejiga, y ayuda en el injerto posterior de células tumorales.
Ahora, retire suavemente el conjunto de angiocatéter-guía de la uretra. Tome un segundo angiocatéter conectado a una jeringa que contenga la suspensión de células UCC e insértelo en la uretra del ratón. Inyecte las células UCC en la vejiga del ratón. Las células cancerosas interactúan con la mucosa de la vejiga para formar un tumor que con el tiempo puede diseminarse a otros tejidos y órganos.
Para preparar al animal para la inyección de células UCC, use crema depilatoria para afeitar la parte inferior de la espalda de un ratón NOD / SCID hembra de 6 a 8 semanas de edad. Para administrar células UCC en la vejiga, primero, configure una máquina de electrocauterio monopolar a una potencia de 4 vatios. Después de anestesiar al ratón, colóquelo en posición supina con el hocico en un cono nasal de isoflurano y la espalda desnuda firmemente conectada a tierra sobre un electrodo dispersivo.
Lubrique un angiocatéter de calibre 24 con gelatina lubricante y luego inserte el angiocatéter suave pero firmemente a través de la uretra del ratón. Si el catéter se dobla al entrar, inserte el alambre guía hasta la mitad del catéter para proporcionar estabilidad. Luego, inserte completamente la guía recta de núcleo fijo de 0,64 milímetros 1 milímetro más allá del extremo del angiocatéter.
Sostenga el pasador monopolar en la guía durante 1 segundo, lo que permite la irritación eléctrica de la mucosa de la vejiga. Conecte un angiocatéter estéril nuevo a una jeringa Luer-Lok de 1 mililitro y extraiga hasta 200 microlitros de células UCC. Retire el alambre guía y el angiocatéter de la uretra y luego inserte el angiocatéter con una jeringa de células adheridas.
Inyecte 50 microlitros de las células en la vejiga del ratón y, para permitir que las células se adhieran a la pared de la vejiga, espere unos segundos antes de retirar el angiocatéter. Finalmente, retire el ratón del cono nasal de isoflurano y la almohadilla de conexión a tierra y obsérvelo durante 1 hora después del procedimiento para detectar signos de angustia.