Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:30 min. • February 22nd, 2023
Los andamios descelularizados de órganos completos consisten en una matriz extracelular tridimensional con una red vascular intacta. Estos andamios conservan la composición específica del tejido y la integridad funcional y desempeñan un papel esencial en la bioingeniería de órganos.
Para preparar un riñón de rata descelularizado, primero, obtenga un riñón de rata recién cosechado junto con su principal vasculatura arterial y venosa: la aorta abdominal y la vena cava inferior. Ate el uréter, las bifurcaciones arteriales menores y venosas para evitar la fuga de líquido durante el proceso de perfusión posterior.
Coloque el riñón en un tampón adecuado para garantizar la hidratación de los órganos. Inserte catéteres del tamaño adecuado en las vasculaturas principales y asegúrelos. Conecte el catéter a una bomba peristáltica. Perfundir el riñón con un tampón que contenga anticoagulante a un caudal y presión adecuados durante el tiempo deseado.
Este paso ayuda a eliminar eficazmente la sangre del órgano a través del flujo venoso. Cambiar el perfundido a un tensioactivo no iónico para permeabilizar las membranas celulares. A continuación, perfunda el órgano con un tensioactivo aniónico para solubilizar eficazmente las membranas celular y nuclear, lo que da lugar a la lisis celular y la liberación de contenidos intracelulares.
Los componentes celulares liberados y los desechos fluyen fuera del riñón, haciéndolo gradualmente translúcido. Inyecte el riñón descelularizado con un tampón adecuado que contenga antibióticos y anticoagulantes para eliminar el surfactante residual y cualquier residuo restante del órgano. Los antibióticos previenen la probabilidad de crecimiento bacteriano dentro del órgano descelularizado.
Extraer el riñón izquierdo con la aorta abdominal y la vena cava inferior. Ligue el uréter, la aorta torácica, la vena cava superior y las ramas de la aorta abdominal. Mantenga el órgano hidratado en DPBS en una placa de Petri de 10 centímetros. Canular la aorta abdominal y la vena cava inferior con un catéter de calibre 23.
Para eliminar la sangre residual, conecte la cánula con una bomba peristáltica y lave el órgano con 500 mililitros de DPBS y 16 unidades por mililitro de heparina durante 90 minutos a 5 rpm y 37 grados centígrados. Para descelularizar el riñón, perfundirlo con Triton X-100 al 1% durante 3 horas y luego con solución SDS al 0,75% durante 6 horas a una presión constante de 40 mililitros de mercurio.
Para eliminar la SDS residual, perfundir la muestra con penicilina al 1% en agua destilada durante 18 horas y luego con DPBS estéril y 16 unidades por mililitro de heparina durante 90 minutos.