Tinción de ADN extracelular: un método para identificar el ADN extracelular en secciones de tejido FFPE

Una célula moribunda libera una fracción de ADN fuera de la célula llamada ADN extracelular. Para teñir el ADN extracelular, comience tomando una sección de tejido fijada en formol e incluida en parafina, o FFPE, en un portaobjetos de vidrio. Caliente el portaobjetos de vidrio durante el tiempo deseado. Esto facilita la adhesión del tejido a la superficie del portaobjetos y suaviza la parafina circundante.

Sumerja el portaobjetos en líquido de desparafinación para disolver completamente la capa de parafina alrededor del tejido. A continuación, sumerja el portaobjetos en concentraciones decrecientes de etanol para rehidratar el tejido desparafinado. Después de la rehidratación, sumerja el portaobjetos en una solución de recuperación de antígenos hirviendo. Este tratamiento desenmascara los epítopos que fueron alterados durante el proceso de fijación.

Superponga el portaobjetos con anticuerpos primarios y permita que se unan a epítopos específicos sin enmascarar presentes en la célula. Luego, agregue anticuerpos secundarios marcados con fluorescencia, que se unen a los anticuerpos primarios. Sumerja el portaobjetos en una solución de Sudan Black para reducir la autofluorescencia de f