Análisis de patch-clamp perforado mediado por anfotericina-B: una técnica electrofisiológica para estudiar las corrientes iónicas en las células de la vejiga urinaria
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 4:20 min. • April 30th, 2023
La técnica de pinza de parche perforada permite mediciones en tiempo real de las corrientes iónicas asociadas con la actividad de los canales iónicos en células como el músculo liso detrusor, o DSM, células de la vejiga urinaria.
Para comenzar, cargue la suspensión celular DSM en una cámara de vidrio e incube para permitir la adherencia celular. A continuación, agregue una solución extracelular que contenga iones de tetraetilamonio y cesio a las células adheridas. Estos cationes bloquean los canales de potasio en la membrana celular e inhiben las corrientes de potasio que interfieren.
Posteriormente, tome una pipeta de pinza de parche pulida, un tubo de vidrio delgado y hueco que contiene un electrodo de grabación conectado a un amplificador. Llene la pipeta con una solución intracelular y rellénela con la misma solución pero que contenga anfotericina-B, un antibiótico perforante de membrana.
Ahora, sumerja la punta de la pipeta en la solución extracelular que contiene células DSM. Después de ajustar el potencial y la corriente a los niveles adecuados, avance la punta de la pipeta hacia la membrana celular y controle simultáneamente la resistencia del electrodo.
Un aumento rápido e
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