Modelado de tumor ortotópico de vejiga en modelo de ratón: un procedimiento para la administración intravesical de células cancerosas en la vejiga murina

La instilación intravesical facilita la administración de células cancerosas en la vejiga urinaria de un animal receptor. Para comenzar, prepare un ratón hembra anestesiado en posición supina sobre una almohadilla térmica para regular su temperatura corporal. Vacíe la vejiga de orina.

A continuación, ensamble un catéter conectado a una jeringa que contenga solución de poli-L-lisina o PLL. Lubrique la punta del catéter para asegurar una inserción uretral suave y acceder a la vejiga. Después de la inserción, inyecte lentamente la solución de PLL en la vejiga.

La administración lenta de la LPL previene el reflujo vesicoureteral, el reflujo de orina de la vejiga a los uréteres y los riñones. Coloque un tapón en el catéter para evitar la salida prematura. Las moléculas de PLL inyectadas con carga positiva interactúan y se adhieren al recubrimiento de glicosaminoglicanos con carga negativa en la pared interna de la vejiga.

Retire el catéter y libere la vejiga de la solución de PLL no unida y la orina. Usando otro conjunto de catéter-jeringa, inyecte lentamente una suspensión de células cancerosas enfriadas en la vejiga para prevenir el reflujo vesicoureteral y la consiguiente implantación de células en los riñones. Fije el tapón en el catéter.

La carga superficial alterada de la capa de glicosaminoglicanos mejora su interacción electrostática con las células cancerosas, facilitando su adhesión. Retire el catéter y elimine la vejiga de células cancerosas y orina no adheridas. Con el tiempo, las células cancerosas implantadas dentro de la vejiga proliferan para establecer tumores primarios.

Una vez que un ratón hembra ha sido anestesiado, proporcione hidratación mediante una inyección intraperitoneal de solución de Hartmann a 0,1 mililitros por 10 gramos de peso corporal. Repita esto cada una o dos horas durante la anestesia.

A continuación, aplique ungüento oftálmico estéril en ambos ojos. Vuelva a aplicar según sea necesario. Luego, coloque el ratón en posición supina sobre toallas de papel sobre una almohadilla térmica para mantener la temperatura corporal. A continuación, asegure las patas traseras con cinta adhesiva. Ahora, aplique una presión suave en la región abdominal inferior y recoja la orina en un tubo de 1,5 mililitros.

Luego, cargue una jeringa de 1 mililitro con PLL estéril y conecte un catéter intravenoso de calibre 24 sin el estilete de la aguja. Aplique lubricante en la punta del catéter. Luego, inserte el catéter en la uretra y, con fórceps, guíelo hasta la vejiga. Deténgase cuando sienta resistencia. Luego, expulse lentamente 50 microlitros de PLL a una velocidad de 10 microlitros cada 20 segundos para evitar el reflujo vesicoureteral.

Ahora, deje el catéter en la vejiga durante 20 minutos con un tapón para evitar la salida. Después de 20 minutos, retire el catéter y elimine cualquier contenido de la vejiga presionando suavemente la parte inferior del abdomen. Luego, con una jeringa de 1 mililitro, enjuague el contenido restante del catéter.

Ahora, mezcle bien las células MB49-PSA pipeteando y cárguelas en una jeringa de 1 mililitro. Conecte el catéter y lubríquelo como antes. Inserte el catéter en la vejiga como antes y comience con la inyección de las células mediante una expulsión gradual de 10 microlitros cada 20 segundos. Luego, espere una hora.

Después de una hora, retire el catéter y deje la vejiga de cualquier contenido. Luego, suelte el mouse. Colóquelo en su lado ventral y revívalo con una inyección de atipamezol. Ahora, monitoree al ratón hasta que recupere la decúbito esternal, y luego devuélvalo a su jaula de origen.