Aislamiento de exosomas: una técnica de ultracentrifugación basada en la densidad que utiliza un cojín de sacarosa para separar exosomas de medios acondicionados de células cultivadas

Los exosomas, vesículas unidas a la membrana de tamaño nanométrico que transportan biomoléculas funcionales, son secretados activamente por la mayoría de los tipos de células y pueden aislarse de sobrenadantes de cultivo celular in vitro. Para aislar los exosomas, primero, coseche el sobrenadante o el medio condicionado de un cultivo celular de interés. Los medios acondicionados contendrían exosomas, proteínas, desechos celulares y vesículas.

Centrifugar el medio para granular los desechos celulares. Recoja el sobrenadante que contiene exosomas y fíltrelo a través de filtros celulares para eliminar las vesículas más grandes. Transfiera un volumen específico del medio filtrado a un tubo nuevo. A continuación, mezcle las concentraciones adecuadas de sacarosa y óxido de deuterio para preparar un cojín de sacarosa, un gradiente discontinuo de sacarosa.

Agregue un volumen específico de la solución de cojín de sacarosa en el tubo que contiene el medio; la solución forma una capa separada en la parte inferior. Ahora, centrifuga el tubo a alta velocidad. El cojín de sacarosa facilita la migración de exosomas del medio a la solución de sacarosa mientras mantiene la integridad del exosoma. L