Aislamiento de células renales murinas: una técnica para aislar y generar cultivo primario de células epiteliales tubulares renales

Para aislar las células epiteliales tubulares renales o TEC, comience tomando un riñón de ratón recién aislado en una placa de Petri. Despegue la cápsula renal, la capa externa delgada que rodea el riñón, y retire la médula o la parte más interna del riñón, dejando la corteza que contiene el túbulo y las células epiteliales tubulares.

Pica las partes restantes del riñón en trozos pequeños e incuba en un tampón de digestión caliente que contenga la enzima colagenasa. La colagenasa descompone la proteína de colágeno que mantiene unidos los tejidos renales, liberando los túbulos renales y las células renales en suspensión.

Filtre la suspensión para eliminar los tejidos renales no digeridos. A continuación, agregue medios de cultivo preenfriados al filtrado. La temperatura más baja neutraliza la colagenasa y detiene la digestión de los tejidos. Centrifugar el filtrado a baja velocidad para permitir que los túbulos más densos y las células tubulares se asienten mientras otros tipos de células e impurezas permanecen suspendidos.

Elimine esta fracción de sobrenadante no deseada y agregue medios de cultivo para volver a suspender el sedimento. Sembrar la suspensión en una placa de cultivo