Inyección hidrodinámica de pelvis renal: una técnica para administrar directamente el ADN a las células renales de un modelo murino

Para administrar ADN plasmídico directamente en las células renales del ratón, comience colocando un ratón anestesiado en posición lateral. Prepara al ratón quitándole el pelaje dorsal del costado. Localice un sitio de incisión apropiado en el flanco izquierdo, debajo de la caja torácica.

Haga una pequeña hendidura en la piel y las capas musculares subyacentes. A continuación, aplique una presión suave sobre la cavidad abdominal para exponer el riñón a través del sitio de la incisión. Retire parcialmente el tejido graso perinefrítico superpuesto para visualizar la pelvis renal.

Ahora, tome una jeringa que contenga ADN plasmídico en un tampón de administración hidrodinámica. Inserte la aguja directamente en la pelvis renal, una porción triangular dilatada del uréter en el riñón. Inyecte la solución plasmídica rápidamente de modo que el ADN llegue directamente al parénquima renal, la parte funcional del riñón que filtra la sangre.

La entrega rápida de un gran volumen de líquido a través de la pelvis renal genera una alta presión, creando poros transitorios en la membrana plasmática de las células del parénquima renal. Esto facilita la entrada de plásmidos en las células. Eventualmente, estos poros se cierran, atrapando los plásmidos dentro de las células.

Finalmente, retraiga la aguja y devuelva el riñón a la cavidad abdominal. Sutura la piel y las capas musculares en el sitio de la incisión.

Use guantes quirúrgicos estériles y, comenzando por el lado de la incisión, frote al animal con un nuevo hisopo de clorhexidina / alcohol tres veces con movimientos circulares. Ahora, ubique el sitio de la incisión. Pellizque la piel con pinzas y, con unas tijeras, corte la capa de piel aproximadamente a 1 centímetro de la columna vertebral debajo de la caja torácica. Haga otro corte central debajo de la capa muscular. Localice el riñón y, sin tocarlo, expóngalo suavemente desde la cavidad abdominal aplicando una presión suave y constante sobre el abdomen con los dedos.

Exponer el riñón a veces es difícil. Aplique una presión suave en el abdomen y la columna vertebral para evitar dañar el bazo. Si salen órganos que no sean el riñón, devuélvalos suavemente a la cavidad corporal con fórceps cerrados si es necesario.

Luego, separe suavemente el riñón de la grasa circundante lo suficiente como para visualizar la pelvis renal, que se puede ver como un pequeño punto blanco. Después de visualizar la pelvis renal, use fórceps cerrados para empujar hacia abajo el lado derecho del riñón para que la pelvis renal permanezca a la vista. Luego, sujete la jeringa de insulina cargada con la mano derecha sosteniéndola paralela a la superficie de trabajo e inserte la aguja con cuidado en la pelvis renal.

Una vez insertada la aguja, inyecte la solución rápidamente en 3 segundos. Deje que la aguja permanezca en su lugar durante aproximadamente 10 segundos para evitar el reflujo de la solución. Luego, retire la aguja lenta y cuidadosamente y regrese el órgano a la cavidad abdominal estirando suavemente el sitio de la incisión con fórceps cerrados. Ahora, sutura la capa muscular con 5-0 suturas absorbibles y coloca de 2 a 4 nudos independientes. Del mismo modo, sutura la capa de la piel con suturas de nailon no absorbibles 5-0 o 6-0 y coloca de 2 a 4 nudos independientes.