Análisis de expresión de proteínas basado en matrices de proteínas de fase inversa: un procedimiento para la cuantificación simultánea de la expresión de múltiples proteínas a partir de lisado celular

Una muestra tumoral contiene una población heterogénea de proteínas. Usando lisado tumoral, se pueden analizar varias proteínas de este tipo en paralelo para identificar la proteína de interés. Esta técnica de alto rendimiento se denomina matrices de proteínas de fase inversa o RPPA.

Para realizar RPPA, comience tomando un portaobjetos de vidrio de inmunoensayo recubierto con nitrocelulosa. Detecte una variedad de proteínas lisadas de tumores en el portaobjetos. Incubar para permitir la captura de proteínas en nitrocelulosa. Posteriormente, trate el portaobjetos con un tampón de bloqueo que bloquee los sitios de unión de anticuerpos no específicos en las proteínas.

Retire el exceso de solución de bloqueo. Ahora, monte el portaobjetos recubierto de proteína en un soporte y séllelo herméticamente. Esto crea pozos temporales sobre la superficie del portaobjetos. A continuación, cargue los pocillos con una solución de anticuerpos primarios. Estos anticuerpos reconocen los epítopos presentes en el objetivo correspondiente de una mezcla de proteínas en la matriz.

Finalmente, agregue anticuerpos secundarios marcados con fluorescencia. Estos anticuerpos se unen a los anticuerpos primarios