Ensayo de protección enzimática basado en lisostafina: un método in vitro para cuantificar la carga intracelular de Staphylococcus aureus mediante la muerte selectiva mediada por enzimas de bacterias extracelulares

Comience con una monocapa de células epiteliales en un medio de cultivo adecuado. Estas células expresan integrinas, receptores de superficie que abarcan la membrana. El medio de cultivo contiene fibronectina secretada por células epiteliales, una glicoproteína.

Agregue una suspensión de Staphylococcus aureus, una bacteria patógena grampositiva, a la placa de cultivo. Estas bacterias contienen proteínas de unión a fibronectina, o FnBP, ancladas en su pared celular.

Incubar la placa para iniciar la infección bacteriana, en la que la fibronectina se une a la FnBP de las bacterias y a las integrinas de las células epiteliales del huésped. Esta interacción tripartita FnBP-fibronectina-integrina media la internalización bacteriana en el huésped.

Trate las células con lisostafina, una enzima endopeptidasa, e incube. La lisostafina ingresa selectivamente a las paredes celulares de las bacterias extracelulares. Escinde los puentes de pentaglicina en los peptidoglicanos, lisándolos mientras las bacterias intracelulares permanecen protegidas de la lisostafina.

Complemente el cultivo con una enzima proteolítica para desactivar la lisostafina restante, evitando que mate las bacterias intracelu