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Inmunología
0 vistas • 3:05 min • July 8th, 2025
Los monocitos son células inmunitarias que se diferencian en macrófagos y células dendríticas presentadoras de antígenos para proteger contra las infecciones.
Para cultivar monocitos e inducir su diferenciación in vitro, comience tomando una suspensión de monocitos humanos primarios en un medio de cultivo adecuado. Agregue la suspensión celular en los pocillos de una placa de cultivo. Incubar en condiciones fisiológicas para permitir que las células se adhieran.
Agregue citocinas inductoras de diferenciación: factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos, o GM-CSF, a un pocillo y factor estimulante de colonias de macrófagos, o M-CSF, a otro. Incubar durante un tiempo adecuado.
El GM-CSF se une a su receptor heterodimérico en las células e induce la diferenciación de los monocitos. La unión de GM-CSF da como resultado la activación de vías de señalización intracelular, lo que lleva a la expresión de genes para cebar en un fenotipo similar a un macrófago M1.
Las células similares a M1, células redondeadas con un gran volumen citoplasmático, son proinflamatorias y ayudan en la defensa contra la infección.
En el otro pozo, el M-CSF se une a su receptor homodimérico en los monocitos e induce la diferenciación de las células. La unión de M-CSF da como resultado la activación de vías de señalización intracelular diferentes de GM-CSF, lo que lleva a la expresión de genes para cebar en un fenotipo similar a un macrófago M2.
Las células similares a M2, con una forma alargada, son antiinflamatorias y exhiben funciones de remodelación y reparación de tejidos.
Las células de macrófagos diferenciadas están listas para más ensayos posteriores.
Después del recuento, vuelva a suspender los monocitos aislados a una velocidad de 1 por 10 a la sexta célula por mililitro de medio RPMI 1640 sin suero de 37 grados Celsius suplementado con antibióticos, y coloque 1 mililitro de células resuspendidas en placas de 35 milímetros en un gabinete de bioseguridad. Luego, coloque las placas en la incubadora de cultivo celular durante 30 a 60 minutos para permitir que las células se adhieran al fondo de los pocillos.
Para preparar macrófagos con un fenotipo similar a M1, agregue 100 microlitros de suero fetal bovino que contenga 25 nanogramos por mililitro de GM-CSF a cada placa. Para preparar macrófagos con un fenotipo similar a M2, agregue 100 microlitros de bovino fetal que contenga 50 nanogramos por mililitro de M-CSF a cada placa.