Ensayo de degranulación de mastocitos para estudiar el efecto de un producto químico objetivo

Mastocitos: glóbulos blancos especializados, contienen gránulos secretores ricos en enzimas lisosomales, como la beta-hexosaminidasa.

Para realizar la desgranulación de mastocitos, un proceso que implica la liberación de gránulos secretores, comience con una placa de pocillos múltiples que contenga una suspensión de mastocitos peritoneales murina pretratada con inmunoglobulinas.

Trate las células con un químico objetivo. La sustancia química diana con potencial estimulante interactúa con las inmunoglobulinas preunidas en los receptores específicos de los mastocitos. Esto activa el movimiento de gránulos que contienen beta-hexosaminidasa a la superficie celular, liberándola en la solución.

Centrifugar la placa para granular las células y transferir el sobrenadante que contiene enzimas a un pozo vacío de una placa nueva. Trate los gránulos celulares con un tampón de lisis para lisar las células y liberar su contenido en el lisado, incluida la beta-hexosaminidasa intracelular.

Agregue el lisado que contiene enzimas en otro pocillo de la misma placa de pocillos múltiples. Trate ambos pocillos con el sustrato de la enzima, p-nitrofenil-acetil-D-glucosamina, e incube. Las enzimas hidroli