Aislamiento y cultivo de células de Kupffer de ratón

Las células de Kupffer son macrófagos residentes localizados en los sinusoides hepáticos que ayudan a proteger el hígado de infecciones.

Para aislar las células de Kupffer de ratón, tome un hígado de ratón perfundido recién cosechado en un plato que contenga medio. El paso de perfusión hepática con colagenasa digiere la matriz extracelular, provocando la disociación de las células hepáticas.

Rompe la cápsula hepática para liberar las células hepáticas disociadas, incluidas las células parenquimatosas, las PC y las células no parenquimatosas, las NPC, incluidas las células de Kupffer, las células endoteliales, las células estrelladas y los eritrocitos restantes.

Filtro para eliminar los residuos. Realice una centrifugación diferencial a baja velocidad en el filtrado para sedimentar selectivamente los PC. Recoja el sobrenadante que contiene NPC. Centrifugar para concentrar las células.

Vuelva a suspender las células en medio y capas, en un gradiente de densidad isotónica discontinuo, con dos capas de medios de gradiente de diferentes densidades. Con la centrifugación, las células se separan en función de su densidad en relación con el medio de gradiente.

Recoge la capa NPC enriquecid