Aislamiento de macrófagos del ganglio de la raíz dorsal del ratón mediante disociación mecánica

El ganglio de la raíz dorsal, o DRG, es un grupo de cuerpos celulares neuronales a lo largo de la médula espinal que transportan información sensorial desde el sistema nervioso periférico hasta el central. La lesión de los nervios periféricos provoca la acumulación de macrófagos en el GRD y el desarrollo de dolor neuropático.

Para aislar macrófagos viables utilizando un método libre de enzimas, tome tejido DRG de ratón recién disecado en un homogeneizador lleno de tampón helado para limitar el estrés celular. Usando un mortero, homogeneice mecánicamente el tejido para liberar las células.

Filtre a través de un filtro celular para eliminar los grumos celulares y obtener una suspensión unicelular en el flujo continuo. El homogeneizado de tejido contiene neuronas y células no neuronales, que incluyen macrófagos y mielina flotante, la vaina aislante de las neuronas.

Agregue el homogeneizado filtrado en un tubo que contenga un medio de gradiente de densidad y centrifuge. Bajo la fuerza centrífuga, las células viables con mayor densidad de flotación se depositan en el fondo del tubo para formar un gránulo, mientras que la mielina permanece suspendida. Deseche el sobrenadante.

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