Evaluación funcional de linfocitos B secretores de anticuerpos mediante el ensayo ELISpot

Las

células B secretoras de anticuerpos, o ASC, son células B diferenciadas que secretan isotipos de anticuerpos, incluidas IgG e IgM, para garantizar la protección contra patógenos.

Para realizar una evaluación funcional de las ASC in vitro, comience con el ensayo de punto inmunoabsorbente ligado a enzimas. Tome una placa ELISpot que contenga una membrana de fluoruro de polivinilideno activado en la base.

Incubar los pocillos con fragmentos de anticuerpos policlonales que contengan exclusivamente regiones Fab sin la región Fc del anticuerpo. Cada región Fab tiene un sitio de unión para isotipos de anticuerpos específicos: IgG o IgM, lo que permite la identificación de ambos isotipos.

Durante la incubación, los fragmentos de anticuerpos se adhieren a la membrana, lo que lleva a la inmovilización.

Superponga los pocillos con soluciones de bloqueo para evitar la unión no específica. Siembre la placa con células B secretoras de anticuerpos activados e incube. Las ASC secretan diferentes isotipos, incluidos IgG e IgM, que se unen a los fragmentos de anticuerpos unidos a la membrana.

Lave la placa con un tampón para eliminar los anticuerpos secretados no unidos. Tratar algunos pocillos