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Inmunología
0 vistas • 3:03 min • July 8th, 2025
Los adipocitos, o células que almacenan grasa, son las células predominantes del tejido adiposo, que secretan adipocinas, moléculas de señalización inmune que regulan la respuesta inmune.
Para generar adipocitos in vitro, comience con una placa de pocillos múltiples que contenga un cultivo adherente de células estromales de médula ósea de ratón, BMSC, células multipotentes indiferenciadas.
Trate las células con un medio de inducción de adipocitos que contenga inhibidores de la enzima fosfodiesterasa y dexametasona, un glucocorticoide sintético, para desencadenar la diferenciación de las células.
Los inhibidores ingresan a las células y desactivan las fosfodiesterasas de nucleótidos cíclicos, enzimas esenciales para degradar el monofosfato de adenosina cíclico o cAMP. Esta inhibición da como resultado un aumento de los niveles de AMPc intracelular, críticos para la diferenciación celular.
La dexametasona se une a los receptores intracelulares en las BMSC y entra en el núcleo para activar los genes involucrados en la síntesis y acumulación de lípidos. Esto induce la diferenciación de las BMSC en preadipocitos, las células precursoras de los adipocitos maduros.
Reemplace el medio gastado con un medio de inducción fresco para mantener los preadipocitos. Después de una duración específica, trate las células con un medio base de adipocitos que contenga glucosa e insulina altas.
La insulina se une a sus receptores específicos de la superficie celular y activa la translocación de transportadores de glucosa en la superficie celular, lo que facilita la absorción de glucosa en los preadipocitos. Las células utilizan el exceso de glucosa para sintetizar las gotas de lípidos, lo que lleva a la adipogénesis, el proceso de acumulación de lípidos, que promueve la diferenciación en adipocitos maduros.
Trate las células con un tinte de lípidos y obsérvelas bajo un microscopio óptico. Los adipocitos maduros aparecen como células redondas con múltiples gotas de lípidos rojos.
Para inducir la diferenciación de adipocitos de células madre de médula ósea, reemplace el medio de cultivo celular de un cultivo de células de médula ósea confluente con medio de inducción de adipocitos. Después de dos días de cultivo, reemplace el sobrenadante con medio fresco de inducción de adipocitos, cambiando a medio a base de adipocitos el día 4. El día 7, confirme que las células han acumulado gotas de lípidos y que la visualización del fenotipo es similar a la de los adipocitos maduros.