Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:19 min. • July 8th, 2025
La encía, o tejido de las encías, rodea la porción cervical de los dientes y la mandíbula.
El tejido gingival comprende una capa epitelial, separada del tejido conectivo subyacente por una membrana basal rica en colágeno IV. El tejido conectivo gingival contiene una red de células inmunitarias, que incluye linfocitos, mastocitos y neutrófilos que protegen la encía de las infecciones.
Para aislar la red de células inmunitarias gingivales, tome bloques de dientes murinos que contengan tejido gingival firmemente adherido. Trate los bloques con un cóctel de enzimas, que contiene colagenasas y ADNasas tipo cuatro.
Las colagenasas ingresan al tejido, degradan el colágeno-IV y alteran la membrana basal y el epitelio gingival, lo que hace que la encía se afloje de los dientes. Mientras tanto, las ADNasas degradan los contaminantes del ADN. Agregue un agente quelante al tubo; para eliminar cationes divalentes y prevenir la agregación celular.
Transfiera los bloques de dientes digeridos a una placa de Petri que contenga medio de ADNasa. Extraiga el tejido gingival de los bloques dentales y transfiéralo a un colador celular.
Con un émbolo, triture el pañuelo. Esta disociación mecánica interrumpe la capa conectiva gingival, liberando las células inmunitarias del tejido. Lave el colador con medio y recoja las células liberadas en el filtrado.
Centrifugar el filtrado, peletizar las células, y desechar el sobrenadante que contiene enzimas residuales y desechos. Vuelva a suspender la población celular que transporta células inmunes en medios completos, listos para análisis futuros.
Elimine el exceso de tejido del borde de la encía y transfiera los bloques maxilares y mandibulares a un tubo cónico de 50 mililitros que contiene 5 mililitros de colagenasa y ADNasa en hielo. Digerir el tejido en una incubadora agitadora a 37 grados centígrados durante 1 hora, añadiendo 50 microlitros de EDTA 0,5 molares durante los últimos cinco minutos. Luego, agregue 5 mililitros de medio de ADNasa fría a los pañuelos y mezcle suavemente el contenido del tubo girando. A continuación, transfiera los cuatro bloques de tejido a una placa de Petri y cúbralos con 500 microlitros de medio de ADNasa fresca.
Use un bisturí para quitar la encía de cada bloque de tejido y transfiera todo el contenido del plato a un colador de células de 70 micras en la parte superior de un tubo de 50 mililitros. Lave la placa de Petri y el colador con 3 a 5 mililitros de medio de ADNasa fresca y luego, use el émbolo de una jeringa estéril de 3 mililitros para aplastar el tejido gingival contra la malla del colador. Enjuague el colador con 30 a 35 mililitros de medio de ADNasa frío y centrifugue el filtrado. Luego, vuelva a suspender el gránulo en un mililitro de medio completo y determine el número de células viables.