Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 4:49 min. • July 8th, 2025
Las trampas extracelulares de macrófagos, MET, son estructuras en forma de red liberadas por los macrófagos para atrapar y eliminar patógenos.
Los MET comprenden fibras de cromatina extracelular asociadas con la metaloproteinasa-9 de la matriz, MMP-9 y la histona H3, H3Cit citrulinada, una proteína histona modificada en la que la arginina se convierte en citrulina.
Para caracterizar los MET en secciones de tejido pulmonar murino fijado en formol e incluido en parafina, en primer lugar, secar los portaobjetos. Sumergir en xileno para desparafinar las secciones. Use etanol acuoso para rehidratar las secciones.
Caliente las secciones para romper los enlaces cruzados de proteínas inducidos por formalina, exponiendo los antígenos diana para la posterior unión de anticuerpos.
Agregue una solución que contenga proteínas para bloquear los sitios de unión no específicos. Incubar con un cóctel de anticuerpos primarios anti-MMP-9, anti-H3Cit y anti-F4/80.
El anticuerpo anti-F4/80 se une a la glicoproteína F4/80 de la superficie celular de los macrófagos. Los anticuerpos anti-MMP-9 y anti-H3Cit se unen a los MMP-9 y H3Cit en los MET, respectivamente. Agregue diferentes anticuerpos secundarios
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