JoVE Encyclopedia of Experiments
Inmunología
0 vistas • 3:51 min • July 8th, 2025
Los neutrófilos, células inmunitarias con núcleos multilobulados, regulan la inmunidad traqueal al engullir patógenos invasores.
Para separar los neutrófilos de la secreción traqueal, comience con un canal microfluídico en espiral.
El canal en espiral se origina en la entrada central, extendiéndose progresivamente y bifurcándose en salidas de pared internas y externas. El canal de bifurcación tiene diferentes espesores, lo que garantiza una separación eficiente. Cada canal curvo se asemeja a un trapezoide, con la altura de la pared exterior mayor que la de la pared interior, generando un patrón de flujo variable.
Llene la entrada con una secreción traqueal humana diluida y prefiltrada que comprenda agregados de mucina, neutrófilos y eritrocitos, como contaminantes incidentales. Haga fluir la muestra a un caudal específico a través del microcanal espiral que conduce a la dispersión de las células y los agregados.
A medida que las células viajan a través del canal trapezoidal, experimentan fuerzas de arrastre e impulso inercial de Dean. La interacción entre estas dos fuerzas crea un equilibrio, separando las células por su tamaño. Como resultado, los neutrófilos de mayor tamaño se acumulan cerca de la pared interna del canal, mientras que los eritrocitos y los agregados de mucina permanecen cerca de la pared externa del canal.
Finalmente, los neutrófilos se mueven a través del canal más amplio y se recogen en la salida de la pared interna.
Por el contrario, el canal estrecho recoge eritrocitos y agregados de mucina en la salida de la pared exterior, lo que garantiza una separación eficiente de neutrófilos.
Use una jeringa de 10 mililitros para recolectar 1 mililitro de muestras de secreción de las vías respiratorias en 9 mililitros de solución salina tamponada con fosfato. A continuación, con la ayuda de una pipeta roma, homogeneizar la muestra de moco. Luego, use un colador de células de nailon de 40 micrómetros para colar el diluyente y eliminar grandes trozos de tejido o coágulos de sangre. Una vez finalizado el colado, ponga la muestra en hielo.
Luego, agregue 50 mililitros de solución salina tamponada con fosfato al diluyente de muestra de 0.5 mililitros para lograr una concentración final de 1,000 veces la muestra diluida. Utilice la guía de fluidos para ensamblar el chip PDMS con el fin de aplicar un flujo uniforme a cada uno de los cuatro microcanales en espiral. A continuación, use un conector Luer macho con un diámetro de 1/16 de pulgada para conectar a la entrada, la salida de la pared interior y los puertos de salida de la pared exterior de la guía de fluidos.
Luego, conecte un tubo de silicona a la suspensión de muestra. A continuación, conecte la bomba peristáltica al tubo de entrada. Coloque el tubo de salida de la pared exterior en el depósito de residuos. Luego coloque el extremo del tubo de entrada y el tubo de salida de la pared interior en el depósito de muestra.
Después de colocar el tubo, deje un tubo de 50 mililitros lleno de 5 mililitros de solución salina tamponada con fosfato sin calcio ni magnesio en el depósito de muestra. Luego, para cebar el dispositivo, comience a bombear a un caudal de aproximadamente 1 mililitro por minuto.
Después de colocar la muestra en el depósito de muestras, encienda la bomba peristáltica y ajuste el caudal a 4 mililitros por minuto. Después de que el volumen de muestra alcance el volumen deseado de aproximadamente 1 a 2 mililitros, detenga la operación y desconecte el tubo.