Marcaje de linfocitos T auxiliares murinos mediante anticuerpos monoclonales radiomarcados

Para radiomarcar los linfocitos T murinos auxiliares que llevan un receptor de células T, TCR, específico para el péptido de ovoalbúmina de pollo, tome un tubo que contenga anticuerpos monoclonales radiomarcados, mAbs, con la actividad radiactiva deseada.

El mAb comprende un mAb murino específico para el TCR expresado en la membrana del linfocito Th murino. Un quelante conjuga el mAb y un isótopo de cobre emisor de positrones, formando un complejo estable.

Diluya los mAbs radiomarcados con solución salina. A continuación, agregue los mAb radiomarcados diluidos a una placa de pocillos múltiples que contenga una suspensión de linfocitos T. Incubar brevemente.

Dentro del cultivo, los mAbs radiomarcados se unen a los TCR en las membranas de los linfocitos T. Después de la incubación, transfiera la suspensión celular a un tubo nuevo.

centrífuga. Deseche el sobrenadante que contiene anticuerpos radiomarcados no unidos. Vuelva a suspender los linfocitos Th en medio y transfiéralos a una placa de pocillos múltiples. Incubar durante un período prolongado.

La unión mAb-TCR radiomarcada provoca el reclutamiento de proteínas adaptadoras al lado citoplasmático de la membrana plasmática, a la qu