Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:20 min. • July 8th, 2025
Para inducir colitis, una enfermedad inflamatoria intestinal, en un modelo murino, tome un ratón alojado en una jaula.
Reemplace el agua potable con una solución de sulfato de dextrano sódico, DSS, un polisacárido inductor de colitis. Permita que el ratón consuma la solución para desarrollar colitis.
Tras el consumo, el DSS ingresa a la luz del colon del ratón. El colon contiene una gruesa capa de moco, que proporciona una barrera física entre los microbios comensales y la monocapa de células epiteliales subyacente.
El DSS penetra en la capa de moco, entrando en las células epiteliales. Dentro de las células, el DSS altera la expresión de proteínas de unión estrecha e induce la apoptosis, lo que resulta en la interrupción de la capa epitelial y la barrera mucosa. Esto permite la entrada de microbios luminales en la lámina propia, el tejido subyacente con células dendríticas y macrófagos residentes.
Las células inmunitarias reconocen los microbios, activando la señalización posterior para secretar citoquinas proinflamatorias. Las citoquinas provocan la infiltración de un gran número de células T que montan una respuesta inmunitaria exagerada, lo que provoca inflamación.
Monitoree el ratón tratado para detectar trastornos gastrointestinales y pérdida de peso, lo que indica la aparición de colitis.
Eutanasia al ratón; aislar quirúrgicamente todo el colon. Divida el colon en secciones proximal, media y distal y agregue un fijador para la preservación del tejido.
El tejido está listo para ensayos posteriores para evaluar la colitis.
Para inducir colitis por sulfato de sodio de dextrano, o colitis por DSS, reemplace el agua potable regular con una solución de DSS al 3% ad libitum durante siete días, midiendo el peso corporal de cada ratón, el consumo de solución de DSS y la producción de heces diariamente. Al final del tratamiento de siete días, coloque al ratón en posición supina y use unas tijeras pequeñas para hacer una incisión en la línea media de tres centímetros de largo en el abdomen.
Luego, use fórceps para levantar el colon para permitir que se separe del mesenterio circundante y extraiga todo el colon hasta que el ciego y el recto sean visibles. Seccionar el tejido en el margen colonocecal y profundo dentro de la pelvis, para liberar el colon proximal y distal respectivamente.
Mida y registre la longitud del colon aislado y use una jeringa de 10 mililitros equipada con una aguja de sonda para enjuagar el colon con 10 mililitros de PBS helado para eliminar las heces y la sangre hasta que el eluido salga claro. Para la identificación histológica, divida las muestras de tejido en secciones proximales, medias y distales del mismo tamaño, y fije los tejidos en paraformaldehído al 4% durante la noche a cuatro grados Celsius.