Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Inmunología
0 visualizaciones • 3:47 min. • July 8th, 2025
Las bacterias marcadas con opsoninas son reconocidas por receptores de neutrófilos específicos, lo que desencadena la fagocitosis con la liberación de especies reactivas de oxígeno, o ROS, y la degradación bacteriana.
Para cuantificar la producción de ROS por neutrófilos in vitro, tome una placa de pocillos múltiples. El pocillo de prueba contiene una biopelícula de Staphylococcus aureus que comprende bacterias incrustadas en la película de matriz extracelular. El pozo de control no tiene la biopelícula.
Incubar la biopelícula con suero humano, permitiendo que las opsoninas séricas opsonicen la biopelícula.
Aspira el suero. Lavar con tampón, eliminando las opsoninas no unidas. Agregue neutrófilos y luminol, un compuesto quimioluminiscente a los pocillos. Centrifugar, acercando los neutrófilos a la biopelícula.
Con un lector de placas, mida la luminiscencia a lo largo del tiempo.
En el pocillo que contiene biopelícula, los neutrófilos se unen a las opsoninas de la biopelícula, provocando la activación de neutrófilos y la internalización bacteriana en fagosomas. Se activan vías de señalización específicas, lo que provoca el ensamblaje de la NADPH oxidasa en los fagosomas.
La NADPH ox
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